Додому Салон ПЦР у діагностиці ВІЛ-інфекції. Принципи використання пцр діагностики віч Віч інфекція пцр не бачить

Салон

ПЦР у діагностиці ВІЛ-інфекції. Принципи використання пцр діагностики віч Віч інфекція пцр не бачить

Для більшості жінок та чоловіків це венеричне захворювання викликає найбільше побоювання. З цієї причини після випадкового інтимного зв'язку без бар'єрної контрацепції, а також при частій зміні статевих партнерів і після хірургічних операцій, розумна людина відчуває певну настороженість. Найнадійніший спосіб внести ясність – це звернутися до клініки та здати ПЛР аналіз на ВІЛ.

Тест по крові можна використовувати для визначення наступних показників:

Спростування/підтвердження наявності ВІЛ у латентний період (у перші тижні після зараження антитіла в аналізах ІФА не виявляються через їхню відсутність або надто низьку концентрацію).
Визначення генотипу ВІЛ-1, ВІЛ-2.
Виявлення статусу у дітей, які народилися від матерів-носіїв (антитіла до ВІЛ тривалий час виявляються у всіх дітей, народжених від ВІЛ-інфікованих жінок. Визначення ДНК вірусу у дітей бажано проводити у віці до 48 годин життя, 1-2 місяці, 3- 6 місяців).
Хибнонегативні, хибнопозитивні та сумнівні результати ІФА тестів.
Діагностика кількості ВІЛ та контроль за зміною вірусного навантаження в динаміці (у разі вже встановленого діагнозу СНІД аналіз методом ПЛР використовується для прогнозу, динамічного спостереження та моніторингу терапії, що проводиться).

Ціна аналізу ПЛР на ВІЛ

Методи	Тип ПЛР аналізу	Ціна
ДНК ВІЛ 1 типу	якісний	2 750
РНК ВІЛ 1 типу у плазмі	кількісний	8 850
РНК ВІЛ, визначення резистентності ВІЛ до інгібіторів протеази та зворотної транскриптази (замовляється разом із "РНК вірусу ВІЛ у плазмі")	-	16 550
РНК ВІЛ, визначення резистентності ВІЛ до інгібіторів інтегрази (замовляється разом із "РНК вірусу ВІЛ у плазмі")	-	16 950
РНК/ДНК HIV-1, визначення тропізму ВІЛ	-	16 950

Мультипрайм дослідження
РНК гепатиту С + ДНК гепатиту В + РНК ВІЛ 1 та 2 типу (ультрачутливий метод)	якісний	3 800

АНАЛІЗ ПЛР НА ВІЛ - КОЛИ ЗДАЮТЬ, НАВІЩО І В ЯКІ ТЕРМІНИ

ДНК ВІЛ.Діагностика ДНК вірусу імунодефіциту людини може бути використана для раннього визначення можливого інфікування після випадку підвищеного ризику (аналізи крові здаються в термін, починаючи через 10-й день після потенційного інфікування). Однак для повного виключення інфекції, необхідно у подальшому проведення повторного дослідження та ІФА діагностики у терміни 4 та 12 тижнів.
Результати аналізу: ДНК ВІЛ (якісний аналіз)- "не виявлено" або "виявлено". В останньому випадку потрібні додаткові повторні дослідження для підтвердження ВІЛ-інфекції. При негативному результаті, але високому ризик інфікування, потрібно повторне обстеження - перездавання крові методом ПЛР або ІФА через деякий час.
РНК ВІЛ.Визначення РНК ВІЛ методом ПЛР кількісний (так зване "вірусне навантаження") - один із показників для оцінки прогнозу перебігу ВІЛ-інфекції та ранній показник ефективності противірусної терапії. Тест показаний для моніторингу перебігу хвороби, вирішення питання початку терапії, оцінки її ефективності.
Дослідження РНК ВІЛ методом ПЛР можна використовувати у дорослих при ранній достовірній діагностиці можливого інфікування після епізоду високого ризику (приблизно через 7-10 днів після можливого інфікування). Присутність високого титру РНК ВІЛ без антитіл дозволяє діагностувати гостру ВІЛ-інфекцію. Однак для уточнення діагнозу необхідне проведення повторного дослідження та ІФА діагностики у строки через 1 та 3 місяці.
Здавання ПЛР РНК ВІЛ у вагітних з цією інфекцією за 3-4 тижні до передбачуваного терміну пологів показано для вирішення питання про метод розродження (через природні родові шляхи або шляхом кесаревого розтину).
Результати аналізу: РНК ВІЛ HIV 1 типу (кількісний аналіз)- "не виявлено" (це в нормі).
Резистентність до ВІЛ.Аналіз на визначення резистентності ВІЛ до інгібіторів протеази та зворотної транскриптази показаний ВІЛ-інфікованим при неефективності терапії, що проводиться, а також у період гострої інфекції перед початком противірусного лікування. Дослідження дозволяє визначити резистентність ВІЛ до лікарських препаратів. За результатами проведеного аналізу інфекціоніст дізнається про наявність мутацій стійкості до інгібіторів протеази, нуклеозидних та ненуклеозидних інгібіторів зворотної транскриптази, а також інформацію щодо кожної амінокислотної позиції, асоційованої з мутацією лікарської стійкості.
Мультипрайм комплексна діагностика:якісне визначення РНК вірусу гепатиту С/ДНК вірусу гепатиту В/РНК вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ) 1 та 2 типу (ультрачутливий метод). Аналіз дозволяє проводити діагностику ВІЛ-інфекції, вірусних гепатитів С та В на ранніх термінах. Дослідження показано для раннього виявлення вірусних гепатитів В та С, ВІЛ 1/2 типу у осіб із групи ризику. Виявлення ДНК чи РНК вірусів свідчить про інфікування.

Терміни готовності даних аналізів крові – від 3 до 7 календарних днів. Здати якісний та кількісний аналіз ПЛР для діагностики ВІЛ інфекції у Москві можна у нашому медичному центрі. Взяття крові щодня, з 10-00, у тому числі на

Одне з найсерйозніших захворювань, яке досі не навчилися виліковувати, спричиняється вірусом імунодефіциту людини.

Виявити збудника в організмі непросто: нині при цьому використовується лише кілька дослідницьких методів.

Один із таких тестів - полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР).

Щоб зрозуміти суд методу полімеразної ланцюгової реакції, слід згадати особливість будови клітин ще зі шкільного курсу.

Будь-яка жива клітина містить білок і два типи нуклеїнових кислот: ДНК та РНК. Вони є найважливішими клітинними структурами, оскільки містять генетичну інформацію, закодовану спеціальним чином.

ДНК-код є суворою послідовністю мікроструктур, які утворюють довгий ланцюжок.

Довідка!Як основа ПЛР використовується можливість нуклеїнової кислоти самостійно репродукуватися.

Коли вірус проникає у здорові клітини, він руйнує ланцюжки ДНК.

У цьому випадку клітина вже не міститиме цілісні ланцюжки, а лише невеликі фрагменти - нуклеотиди. Крім цього, навіть найменші частинки вірусу буде видно.

Саме на виявленні пошкоджених ланцюгів ДНК та залишкових клітин та побудовано метод полімеразної ланцюгової реакції.

При цьому існує два різновиди ПЛР-діагностики:

Якісна. Підходить тим, у кого діагноз не підтверджений: він просто показує, чи є вірус у клітинах.
Кількісна. Пацієнт отримує результат «ДНК вірусу не виявлено», що означає відсутність ВІЛ, або інформація про присутність збудника, що означає ВІЛ-інфікування людини.

Якщо підтверджений діагноз є, призначається кількісний аналіз. З його допомогою визначається кількість копій РНК (ДНК) вірусу крові (клітинах). Кількісний аналіз дозволяє оцінити ефективність лікування ВІЛ-інфікованих, визначити вираженість захворювання, його прогресування.

Які методи діагностики дозволяють виявити ВІЛ-інфекцію розповідається на відео:

Переваги та недоліки цього методу діагностики

Як і будь-який діагностичний захід, ПЛР має свої плюси та мінуси.

До переваг методу відносять:

Висока вірогідність.При ПЛР вдається виявити дрібні залишки вірусу, ймовірність виявлення збудника досягає 80% через 4-5 днів після зараження, 100% - через 14 днів після зараження. Так, найбільша точність досягається щодо ДНК вірусу в клітинах крові: можна виявити вірус за його кількості 1-5 копій на 1 мільйон клітин.
Можливість використовувати різноманітний біоматеріал(Для ПЛР не підходить слина, сеча, піт і сльози, але може використовуватися кров, сперма та статеві виділення у жінок).
Можливість проведення аналізу різні захворювання по одній пробі.За допомогою ПЛР можна виявити ВІЛ, хламідії, герпес, цитомегаловірус, уреаплазму, мікоплазму, гонорею, трихомоніаз, токсоплазмоз.
Швидка швидкість одержання результатів.Існує експрес-обстеження ПЛР, що дозволяє дізнатися про результати діагностики вже за кілька годин.
Висока чутливість: ПЛР, на відміну від, наприклад, ІФА, допомагає виявити вірус вже на перших тижнях після зараження
Можливість отримання результатів вже за кілька днів після зараження.При інфікуванні визначити вірус можна через 5-14 днів, тоді як ІФА доцільно проводити лише через 6 тижнів.
Відсутність вікових обмежень.ПЛР допустимо проводити і в дорослих, і в дітей віком із народження.

Головною особливістю ПЛР-аналізу є те, що він виявляє не антитіла до вірусу, а сам вірус.

Проти переваг виступає лише кілька недоліків:

Дорожнеча.
Імовірність отримання хибно-позитивних результатів - близько 20%. Зазвичай це трапляється з вини персоналу (помилки при заборі чи транспортуванні біоматеріалу, щодо біоматеріалу і розшифровці результатів).
Необхідність застосування передового високого технологічного обладнання, яке має лише деякі клініки.

Увага!Очевидно, що переваг у методики набагато більше, ніж недоліків. Особливо важливо, що за допомогою ПЛР можна виявити захворювання на початковому етапі розвитку та вчасно розпочати лікування.

Результат аналізу ПЛР може бути позитивним через 14-21 день після можливого інфікування. Але якщо аналіз негативний, це гарантує відсутність інфекції. Найкраще провести підтверджуючий тест медом ІФА через 2 тижні.

Про те, як проводиться аналіз ПЛР на ВІЛ, розповідається на відео:

Кому призначається?

Насамперед ПЛР призначається за підозри на ВІЛ. Методика також може бути показовою виявлення захворювань, переданих статевим шляхом, спадкових захворювань.

Довідка!ПЛР-діагностика часто проводиться з ініціативи людини, у якої не виявилися симптоми захворювання, проте є припущення та занепокоєння про можливе зараження, наприклад, після незахищеного статевого акту, нещодавнього переливання крові, контакту із зараженою людиною.

Кому ще показано проведення обстеження?

Людям, у яких аналіз ІФА двічі виявився позитивним. ПЛР дозволить встановити остаточний діагноз.
Донорам, які планують здати кров.
Людям, у яких иммуноблоттинг підтвердив діагноз. Імунний блот - метод діагностики СНІДу, і зазвичай його проводять спільно з ПЛР.
Людям, які перебувають на етапі лікування захворювань, спричинених ВІЛ. ПЛР дозволяє оцінити ефективність терапії.
Новонародженим, мати яких ВІЛ-позитивна (передача вірусу відбувається приблизно 30% випадків). Вже за 2-3 тижні після народження можна визначити, чи відбулося зараження.

Деякі люди проходять обстеження з профілактичною метою, проте це трапляється нечасто, оскільки вартість ПЛР-дослідження висока.

Скільки часу робиться аналіз і де його здати?

Аналіз ПЛР на ВІЛ проводиться у лабораторних умовах.

Сам забір крові проводиться за 5-10 хвилин, а вже наступного дня результати виявляються готовими.

При виборі експрес-діагностики (наприклад, у лабораторіях «Інвітро» або «Гемотест») розшифровка результатів фахівцем займає лише 2 години.

У приватних клініках діагностику, за бажанням, можна пройти анонімно. Для цього потрібно повідомити про це під час особистого візиту: кожному пацієнту надається порядковий номер і надається доступ до особистого кабінету. Тоді людина може дізнатися про результати навіть без повторного візиту до лабораторії.

Про достовірність результатів ПЛР дослідження розповідається на відео:

Вартість дослідження

ПЛР-діагностика не з дешевих, оскільки потребує певного передового обладнання, а також особливих знань спеціаліста.

Обладнання є лише у деяких медичних лабораторіях, що дозволяє встановлювати високу вартість аналізу.

Середня вартість дослідження - 3000-5000 рублів. У деяких регіонах ціна не перевищує 1500-2000 рублів.

Оскільки існує ймовірність хибнопозитивних і хибнонегативних результатів, або ж людина звернулася із запитом занадто рано (вірус ще не порушив структуру ДНК, але вже присутній в організмі), може знадобитися повторне дослідження.

Висока вартість обумовлена і тим, що для діагностики потрібна низка компонентів:

Відрізок ДНК (матриця) призначений для ампліфікації;
Два праймери;
Полімераза - хімічно активний компонент, який прискорює збільшення кількості вірусних частинок у геометричній прогресії;
Дезоксирибонуклеозидтрифосфати;
Заряджені частинки двовалентного магнію;
Спеціальний розчин, у якому здійснюється процес полімеризації. Цей розчин призначений для підтримки відповідного рівня кислотності, концентрації солей кількості магнію в рідині.

Також при дослідженні потрібна невелика кількість вазеліну: він містить жири і при високій температурі закипає, що захищає зразок, що вивчається, від перегріву.

Проведення аналізу

Для проведення аналізу підходить кров, сперма та вагінальні виділення. Як правило, частіше використовують венозну кров.

Забір крові проводиться вранці натще.

Крім цього, до аналізу слід підготуватися:

За 2-3 дні до діагностики слід виключити із раціону жирні продукти.
За 1-2 доби до аналізу виключається алкоголь.
За 2 тижні до аналізу слід припинити прийом імуностимулюючих препаратів.
Останній прийом їжі має відбутися не пізніше ніж за 8 годин до здачі крові.

При заборі крові з вени внутрішній згин ліктя обробляється спеціальним розчином, після чого фахівець проколює шкіру, поміщає голку шприца вени та забирає необхідну кількість крові. Потім голка вилучається, місце знову обробляється спиртовим засобом, пацієнту видається ватка.

Пацієнт повинен на якийсь час зігнути руку, щоб кров зупинилася. Якщо людина почувається добре, вона одразу може йти додому. При запамороченні, нудоті та непритомності йому надають першу допомогу.

Отриманий біоматеріал лаборант поміщає у стерильну колбу та відправляє на діагностику. Фахівець змішує розщеплений біологічний матеріал у спеціальному реакторі з ферментами, які синтезують різні інфекції.

Якщо в крові є дуже мало часток вірусу, при взаємодії з ферментами їх кількість різко зростає: реактиви поєднуються з ДНК вірусу і дублюють її.

Аналіз виробляється у кілька етапів, оскільки розподіл молекул відбувається у геометричній прогресії. З однієї клітини виходить 2, з 2 - 4 тощо.

Аналізуючи думку та відгуки лікарів, можна з упевненістю сказати: нині ПЛР-діагностика є найточнішим методом дослідження на ВІЛ-інфекцію.

Довідка!За допомогою аналізу можна встановити присутність вірусу в організмі вже через кілька днів після зараження, навіть якщо кількість вірусних структур становить лише 1-5 одиниць на мільйон клітин. Однак не варто забувати про недоліки методу, наприклад, ймовірності отримання хибнопозитивних результатів.

Проте ПЛР залишається одним із небагатьох аналізів, які дозволяють вчасно діагностувати захворювання та приступити до лікування.

Методика ПЛР-діагностування спочатку була розроблена 35 років тому американським вченим Карі Муллісом. Винахідник дослідження отримав міжнародну Нобелівську нагороду у 1993 році за своє новаторство. Воно стало незамінним для будь-якої лабораторної діяльності.

ПЛР використовується в молекулярній біології, щоб зробити безліч копій (ампліфікувати) невеликих ділянок ДНК. ДНК-полімераза може додавати нуклеотид тільки в існуючу раніше 3-OH-групу. Тому йому потрібен праймер, до якого може додати перший нуклеотид. Ця вимога дозволяє визначити конкретну ділянку послідовності шаблонів, яку необхідно діагностувати. Наприкінці реакції ПЛР конкретна послідовність накопичуватиметься у мільярдах копій (ампліконів).

ПЛР включає процес нагрівання і охолодження, званий термічним циклом, який виконується спеціалізованою технікою. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) є відносно простою методикою. Вона посилює ДНК-матрицю для отримання специфічних фрагментів ДНК in vitro (аналіз у пробірці). Традиційні методи клонування послідовності ДНК у векторі та її реплікації у живій клітині часто вимагають проведення досліджень від кількох днів до кількох тижнів роботи. Але отримати результати ампліфікації послідовностей ДНК за допомогою ПЛР можна за кілька годин.

Більшість біохімічних аналізів, що використовуються в діагностиці інфекційних захворювань, потребують достатньо великої кількості біологічного матеріалу. Для ПЛР ця умова не є обов'язковою. Таким чином, ПЛР може забезпечити чутливіше виявлення патогену. І вищі рівні ампліфікації певних послідовностей за менший час із досить обмеженою кількістю біоматеріалу. Ці особливості роблять техніку надзвичайно корисною. Не лише у фундаментальних дослідженнях, а й у особистих цілях. Включно з тестуванням генетичної ідентичності, судовою експертизою, промисловим контролем якості.

Основна цінність аналізу полягає у можливості виявлення патологій, що передаються статевим шляхом, до розвитку перших ознак. До аналізу методом ПЛР вдаються за необхідності ранньої діагностики ВІЛ-інфекції. А також визначення РНК вірусу у крові донора. Завдяки високій чутливості аналізу отримати відповідь можна через 7-14 днів після передбачуваного інфікування. Достовірність діагностики сягатиме від 85 до 98%. Проте тест ПЛР призначається не всім. Оскільки є досить дорогим дослідженням. Головне, потребує наявності дорогого обладнання та певних професійних навичок від співробітників лабораторії. Якщо пацієнт раніше не перебував у ситуаціях, пов'язаних із підвищеним ризиком зараження, проведення полімеразної реакції не є доцільним.

Полімеразна реакція якісного типу на ВІЛ

Проведення якісного ПЛР на ВІЛ дозволяє визначити присутність в організмі вірусного захворювання. Пацієнт може отримати результат у вигляді наступних позначок: позитивний, хибнопозитивний, негативний. Але дослідження не дозволяє визначити кількість копій ретровіруса. Якісний аналіз не проводиться пацієнтам, у яких раніше була діагностована інфекція. Не призначається як контроль за ефективністю противірусної терапії.

ПЛР кількісного типу на ВІЛ

Проводиться для визначення копій РНК вірусу в біологічному матеріалі пацієнта. Кількісний ПЛР призначається тільки хворим з раніше виявленою інфекцією, як моніторинг лікування.

ПЛР у реальному часі

Використовується у лабораторній діагностиці для утворення копій ділянок ДНК. Також для одночасного кількісного дослідження та детекції послідовності ДНК у біоматеріалі. По суті, діагностика є кількісним ПЛР.

На замітку!

У різних лабораторіях можна зустріти кілька формулювань діагностики: «ПЛР кількісне визначення» та «ПЛР у режимі Real-time».

Обидва аналізи є ідентичними.

Взяття матеріалу для діагностики ВІЛ

Забір біологічного матеріалу для проведення діагностики ВІЛ за допомогою ПЛР проводиться за певними стандартами. Маніпуляція проводиться у процедурному кабінеті. Використовуються одноразові стерильні інструменти. Розтин пакету з інструментами проводиться безпосередньо біля пацієнта. Зібраний матеріал міститься в стерильні пробірки, попередньо оброблені CrO3 (хромова суміш). Як біологічний матеріал виступає венозна кров, яка здається в ранковий час і на голодний шлунок. За кілька днів до здачі аналізу слід виключити вживання алкоголю, жирної та гострої їжі, припинити прийом медикаментозних препаратів.

Якщо скасувати лікарські засоби неможливо, слід повідомити до проведення аналізу.

Додатково може бути взятий мазок з уретри та піхви для виявлення супутніх захворювань, що передаються статевим шляхом. Дослідження проводиться анонімно, результати пацієнт отримує особисто до рук. При собі рекомендується мати посвідчення особи.

Через скільки часу можна здавати ПЛР на ВІЛ

Виявити наявність ВІЛ-вірусу можливо через 4-6 днів після інфікування. У разі інформативність аналізу досягатиме 85%. Через 10-13 днів аналіз може визначити захворювання з точністю до 98%. Негативний результат буде вірним лише за умови його здачі не раніше, ніж через 2 тижні після передбачуваного зараження.

Причини хибно-позитивного результату

Отримати хибнопозитивний результат досить складно.

Таке можливе за недотримання правил забору біологічного матеріалу, неправильного маркування пробірки, використання неякісної тест-системи та інших подібних факторів. В інших випадках шанс отримання такого результату становить не більше ніж 2%.

Через скільки часу можна одержати результати аналізу?

Якщо дивитися з технічного боку, результати ПЛР можна отримати протягом 4 годин. Однак на практиці пацієнт лабораторний висновок отримує від одного до кількох днів. Загалом терміни проведення залежать від завантаженості лабораторії та від того, наскільки організовано побудовано її роботу.

Проведення полімеразної реакції у новонародженого

ПЛР призначається у разі, коли дитина народжена від ВІЛ-позитивної матері. Проведення ІФА у разі не інформативно. Оскільки у дитини приблизно до 2 років зберігаються антитіла проти ретровірусу. Тому імуноферментне дослідження не дасть точної відповіді. При проведенні ПЛР у дитини віком 4-6 тижнів та отриманні позитивного результату йтиметься про зараження.

Якщо ПЛР, проведений у віці від 8 тижнів до півроку, показує негативні результати (за умови, що дитина не харчувалася грудним молоком матері), інфікування виключається.

Чому для визначення ВІЛ ПЛР краще за ІФА?

Полімеразна реакція дозволяє виявити РНК вірусу, його наявність у організмі, зокрема кількісне. Завдання ІФА полягає у визначенні антитіл до ВІЛ-інфекції. Імуноферментний аналіз щодо визначення можливого інфікування не поступається ПЛР, його точність сягає 99%. Проте, на відміну ПЛР - неспроможний визначити захворювання на ранніх стадіях його розвитку.

Переваги проведення ПЛР на ВІЛ

Полімеразна реакція безпосередньо визначає наявність інфекційного агента. Наприклад, ІФА може виявити виключно антитіла та продукти життєдіяльності мікроорганізму.
Аналіз чітко ідентифікує конкретний патогенний мікроорганізм, навіть за наявності декількох перехресно реагованих.
Методика дозволяє досліджувати будь-який вид біологічного матеріалу, зокрема засохлі краплі крові.

З недоліків ПЛР можна назвати підвищену чутливість аналізу. Це іноді стає причиною отримання хибнопозитивного результату. Таке відбувається у разі присутності в пробірці або інструментах хоча б незначної кількості сторонньої ДНК.

Діагностика ВІЛ за допомогою ПЛР та ІФА: розшифровка, достовірність результатів

Імуноферментний аналіз, при якому результати тестування вказують на відсутність в організмі антитіл до ВІЛ та антигену р24 є негативним. У разі наявності даних молекул - видається позитивний діагностичний висновок. У ряді випадків пацієнт може отримати хибнопозитивний або хибнонегативний результат. Подібне є наслідком раннього терміну вагітності, герпетичної інфекції, некоректно проведеного забору матеріалу, порушення транспортування пробірок. Крім того, подібні результати зустрічаються у пацієнтів з аутоімунними захворюваннями, що протікають, і гепатитами різного типу. Може проводитися Western Blot (імуний блот), який поєднує в собі ІФА та поділ білків вірусу.

Тоді позитивний результат буде за наявності глікопротеїду вірусної інфекції GP160. Він є попередником глікопротеїнів оболонки ВІЛ gp41 та gp120. Якщо даних молекули відсутні, висновок лабораторного дослідження вважається негативним. Проведення Western Blot у поєднанні з ІФА дає змогу отримати результати, достовірність яких перевищує 98%. У разі коли ІФА позитивний, а Western Blot негативний - тестування вважається сумнівним і вимагає проведення ПЛР.

Спосіб лікування хвороби, спричиненої вірусом імунодефіциту людини, не знайдено досі. Натомість діагностика досягла серйозних успіхів. Аналіз на ВІЛ, виконаний методом ПЛР, – один із варіантів виявлення вірусу в організмі.

Полімеразна ланцюгова реакція, або ПЛР, – один із сучасних методів діагностики ВІЛ. У його основі лежить здатність нуклеїнових кислот до саморепродукції. Клітина будь-якого живого організму включає білок та нуклеїнові кислоти:

РНК-рибонуклеїнову,
ДНК-дезоксирибонуклеїнову.

Ці макромолекули зберігають генетичний код. Якщо концентрація вірусних клітин у крові низька, у пробі містяться не цілі ланцюжки ДНК, які окремі «цеглинки» – нуклеотиди. Полімеразна ланцюгова реакція виявляє навіть такі «уламки» вірусних клітин. Цей дозволяє отримати результат на ранніх термінах після можливого зараження, коли перші клінічні симптоми ще не з'явилися.

Найточніший результат можна отримати, використовуючи для аналізу венозну кров. Перед тим, як пройти обстеження, за пару днів . За 2 тижні припинити прийом імуностимулюючих препаратів.

Пробу біоматеріалу розщеплюють у медичному лабораторному реакторі. Потім фракції обробляють ферментами. Реактиви поєднуються з ДНК вірусної молекули та дублюють її. З однієї клітини виходить 2, з 2-х - 4, далі 8. Число зростає в геометричній прогресії. Ланцюгова реакція дозволяє в короткий термін збільшити кількість вірусного компонента і зробити його помітним для лаборантів.

Нормою є негативний результат аналізу, який має такий вигляд: «ДНК вірусу не виявлено». І це є референсное (середньостатистичне) значення.

Переваги та недоліки методики ПЛР при ВІЛ

Діагностика ВІЛ за допомогою ПЛР має незаперечні переваги, але є й суттєві недоліки. До перших відносяться:

Висока точність. Вкрай мала ймовірність отримати хибнонегативні результати.
Універсальність. Для дослідження підходить не лише кров, а й інші біологічні рідини (піхвові виділення, сперма). Слина, сеча також використовуються, але точність результату буде нижчою. У цих середовищах концентрація вірусних клітин незначна.
Широкий спектр аналізу. Один зразок біоматеріалу можна вивчити на кілька захворювань.
Швидкість виконання. Полімеразна ланцюгова реакція відноситься до термінових методів діагностики. Відповідь можна дізнатися вже наступного дня.
Достовірність становить 80%. За допомогою методу ПЛР можна виявити вірусні частинки, навіть якщо їхня концентрація невелика. Це дозволяє діагностувати захворювання на ранніх стадіях та своєчасно розпочинати терапію.
Рання діагностика ВІЛ-інфекції. Час, коли ВІЛ виявляють у крові за допомогою ПЛР – 10-14 днів після передбачуваного зараження. Це стандартний відрізок для діагностики вірусу імунодефіциту. цьому етапі ще виявляються; метод ІФА не працює.
Нема вікових обмежень. Можна проводити це тестування дитині з народження.

Недоліки методу ПЛР при діагностиці ВІЛ:

Вища вартість проти імуноферментним аналізом 3 покоління.
Потрібне складне медичне обладнання.
Похибка 20% через високу чутливість реакції. При аутоімунних захворюваннях, злоякісних пухлинах, хронічних інфекціях ПЛР може дати хибнопозитивний результат.

Кому проводиться ПЛР

Потрібна рання відповідь для попереднього діагностування. ПЛР допомагає підтвердити чи спростувати результати ІФА.
Імуноблот дав позитивний результат. Якщо першим проводиться ПЛР аналіз, обов'язково підтвердження результату методом імунного блоттингу. Дослідження доповнюють одне одного. Використовуючи відразу два методи, медики виключають можливість помилок.
Коли позитивний підтверджений, ПЛР допомагає відстежити ефективність терапії, що проводиться.
Використовується для дослідження донорської крові на наявність.
Проводити ПЛР можна навіть дітям до року. Цей метод застосовується для з'ясування ВІЛ-статусу новонароджених, мами яких є носіями вірусу. Тест, проведений у перші дні життя, покаже, чи відбулося внутрішньоутробне інфікування. Зараження могло статися, коли дитина проходила родовими шляхами. , Придбаний немовлям у процесі пологів, вдасться виявити через 2 - 3 тижні.

Скільки часу робиться аналіз ПЛР і де можна здати

Проведення аналізу ПЛР на ВІЛ та розшифрування результатів не потребує багато часу. Забір крові займає 5-7 хвилин. У стандартному випадку лаборанту достатньо 24 години, щоб підготувати довідку. Діагностування займає трохи більше 8 годин, решта часу потрібно оформлення. Пацієнт отримує звіт наступного робочого дня. виконують протягом 2 годин.

Дослідження на ВІЛ вказаним способом не проводять за полісом ЗМС. Отримати цю послугу безкоштовно у державній поліклініці не можна. Проте практично всі комерційні лабораторії зазвичай мають необхідне обладнання та реагенти. Проведення аналізу ПЛР часто входить до загального скринінгу на ВІЛ. Ціна комплексної діагностики становить від 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можна анонімно. У реєстратурі пацієнту дають індивідуальний номер, яким він дізнається результат. Сучасні медичні центри відображають усі дані на своєму сайті в особистому кабінеті клієнта.

ВІЛ-інфекція - тяжке вірусне захворювання з тривалим безсимптомним періодом, що характеризується ураженням імунної системи людини та небезпечне своєю пізньою діагностикою. Часто терміни «ВІЛ» і «СНІД» вживаються як синоніми, фактично СНІД є термінальною (останньою) стадією ВІЛ-інфекції, тривалість якої становить 1-2 роки. За даними досліджень, з моменту інфікування до вступу хвороби до термінальної стадії за відсутності лікування, в середньому, минає 9-11 років. Рання діагностика захворювання методом ІФА або ПЛР аналізу на ВІЛ дозволяє своєчасно розпочати антиретровірусну терапію, зупинити прогресування хвороби та довгі роки вести повноцінне життя, незважаючи на наявність вірусу імунодефіциту людини в організмі.

Шляхи передачі ВІЛ:

незахищені статеві контакти;
переливання крові та препаратів крові;
використання нестерильних інструментів під час проведення медичних втручань;
поранення медперсоналу нестерильним інструментом;
перинатальне інфікування: передача вірусу під час вагітності та пологів.

Аналізи на СНІД (ВІЛ) призначають:

при випадковому статевому контакті;
при плануванні вагітності та під час вагітності;
під час підготовки до госпіталізації;
при різкому зниженні ваги;
при тривалому підвищенні температури тіла незрозумілого генезу.

Експрес аналіз крові на ВІЛ

ВІЛ відноситься до сімейства ретровірусів (Retroviridae), підродини лентивірусів (Lentivirus). Потрапляючи в організм людини, він вражає клітини імунної системи Т-хелпери, макрофаги, дендритні клітини. Ретровірус трансформує свою РНК на ділянку ДНК, яка вбудовується в геном клітини-господаря. При розподілі ураженої клітини дочірні одержують вірусний геном. До антигенів вірусу на поверхні заражених клітин в організмі виробляються антитіла, на виявленні яких заснована діагностика ВІЛ-інфекції методом імуноферментного аналізу (ІФА). Здавати аналіз рекомендується через 1,5 – 3 місяці після моменту передбачуваного зараження, раніше тест ІФА не інформативний. Лабораторія Гемотест використовує альтернативний метод Real-Time ПЛР (ПЛР з детекцією продуктів у режимі реального часу), що не виявляє антитіла до ВІЛ, а сам вірус в організмі. Маючи високу чутливість і достовірність, метод дозволяє виявляти навіть поодинокі частки вірусу вже через 10 днів (середній показник) з моменту потенційного зараження, коли антитіла в крові ще відсутні.

виявлення вірусу під час «серонегативного вікна»;
при сумнівному результаті імуноблоту;
для визначення генотипу вірусу – ВІЛ-1 або ВІЛ-2;
контролю вірусного навантаження на організм;
для визначення ВІЛ-статусу новонароджених, якщо мати ВІЛ-інфікована;
після переливання крові.

Анонімний аналіз на ВІЛ

Відповідно до п.2, ст.8 ФЗ РФ № 38-ФЗ, пацієнт може анонімно здати аналіз на ВІЛ та отримати результат за індивідуальним номером замовлення, що не підлягає розголошенню. Тим, хто з якихось причин не має можливості приїхати на обстеження в одне з відділень Лабораторії Гемотест, ми рекомендуємо скористатися послугою виїзду медсестри для взяття крові з подальшою реєстрацією взятої проби як анонімного замовлення.

Звертаємо Вашу увагу:результати анонімних аналізів на СНІД (ВІЛ) не можуть бути використані для професійних оглядів, госпіталізації або надання лікаря в поліклініці.

Результати дослідження на ВІЛ незалежно від їх результату видаються лише за особистого звернення пацієнта до лабораторного відділення. Під час обстеження неповнолітніх (до 14 років) дітей – законного представника, зазначеного у замовленні.

Результати видаються за умови пред'явлення договору, кошторису та документа, що засвідчує особу самого пацієнта або представника пацієнта, зазначеного у замовленні.

Телефоном та електронною поштою результати досліджень не повідомляються.

ЯКЩО АНАЛІЗ НА ВІЛ ПРИЗНАЧЕНИЙ В МЕТАХ ПІДГОТОВКИ ДО ГОСПІТАЛІЗАЦІЇ АБО ДЛЯ НАДАННЯ В ЛПУ, РЕЄСТРАЦІЯ ЗАЯВОК НА ЙОГО ПРОВЕДЕННЯ ЗДІЙСНЮЄТЬСЯ при обов'язковому наданні пацієнтом наступних даних

1) Для жителів Москви та Московської області

Прізвище ім'я по батькові
День, місяць та рік народження
Відомості про реєстрацію
Паспорт
Страховий поліс (серія та номер страхового поліса, найменування страхової компанії).

2) Для мешканців інших регіонів РФ та іноземних громадян додатково – ксерокопію (скан) паспорта.

Прізвище ім'я по батькові
День, місяць та рік народження
Відомості про реєстрацію
Страховий поліс (серія та номер страхового поліса, найменування страхової компанії)
Ксерокопія (скан) паспорта

Скільки роблять аналізи на ВІЛ?

Результати тесту ІФА можна отримати через 1 робочий день, але не раніше 1,5-3 місяців з моменту зараження, результат ПЛР-діагностики можна дізнатися вже через 10 днів з моменту передбачуваного зараження. Термін виконання тесту методом Real-Time ПЛР становить 3 робочих днів.