ПЛР аналіз, що це таке знає не багато, хоча сьогодні це один із інноваційних методів діагностики інфекційних захворювань, за який його розробник 1993 отримав Нобелівську премію. Цей високотехнологічний метод дозволяє виявити серйозні захворювання на початковій стадії та своєчасно розпочати їх лікування.
Аналіз ґрунтується на принципах молекулярної біології. Дослідження методом ПЛР полягає у використанні особливого ферменту, що під впливом температурних режимів, копіює РНК та ДНК присутніх у зібраному біоматеріалі бактерій та вірусів. Таке масове розмноження дає можливість лікарю точно визначити, до якого виду належить бактерія, що спровокувала недугу, а також виміряти рівень її концентрації в біоматеріалі. Проводиться процедура копіювання у спеціальному апараті – ампліфікаторі, який нагріває та охолоджує пробірки із зібраним матеріалом, створюючи зручні умови для реплікації.
ПЛР дослідження проводять із багатьох причин, але найчастіше його використовують для визначення наявності таких інфекційних хвороб як:
- герпес;
- статевих інфекцій - хламідіоз, уреаплазмоз, гарднереллез, трихомоніаз;
- кандидоз;
- гепатит;
- мононуклеоз;
- листеріоз;
- цитомегаловірус;
- туберкульоз;
- вірусу папіломи людини;
- кліщовий енцефаліт.
ПЛР аналіз не обмежується сферою застосування в медицині, не рідко скринінг роблять, якщо необхідно зрозуміти, кому належить біологічний матеріал, знайдений на місці злочину, тобто ПЛР аналіз масово застосовують у криміналістиці. Потрібно відзначити, що мазок чи кров на ПЛР беруть, якщо потрібно встановити батьківство. Результати ПЛР діагностики нічим не поступаються звичному аналізу на ДНК спорідненості, та й коштує набагато дешевше.
Особливості діагностики
Аналіз методом ПЛР має велику кількість позитивних сторін. Насамперед, важливо відзначити чутливість тесту. ПЛР аналізатор здатний визначити молекули ДНК бактерій навіть при їх малій кількості, тобто лікар отримує інформацію про ранню стадію захворювання або початок хронічної форми недуги. Аналіз крові ПЛР здатний навіть визначити наявність інфекційного захворювання, що знаходиться у латентній формі і нічим себе не видає.
Потрібно відзначити, що аналіз ПЛР у чоловіків і жінок може бути проведений за наявності будь-якого типу матеріалу, це не обов'язково має бути кров або мазок, підійде слина, клітини шкіри і навіть сеча.
Результати аналізів ПЛР може бути великими, оскільки ПЛР діагностика інфекцій може відхопити відразу кілька збудників захворювань, що у одному зразку біоматеріалу. Обстеження можна пройти в будь-який зручний час, що показує аналіз, людина може дізнатися за короткий проміжок часу, так як результати діагностики біоматеріалу готові вже через 5 годин.
Усі лікарі сходяться на думці, що аналіз крові на ПЛР або іншого матеріалу ніколи не дає помилкових результатів, якщо правильно дотримано методики проведення діагностики. ПЛР позитивний або ПЛР негативний може бути помилковим, тільки за умов, що лабораторні співробітники не мають високого рівня професіоналізму. Якщо вилучений біоматеріал був забруднений або його неправильно зберігали, розшифровка аналізу ПЛР може мати спотворені результати.
Підготовка до проведення діагностики
Мазок на ПЛР у жінок із шийки матки беруть, якщо потрібно визначити захворювання, що передаються статевим шляхом, наприклад, хламідії, уреаплазими або герпес. Якщо ПЛР потрібно провести на ці бактерії чоловікові, то у нього береться виділення з уретри – сік простати, простіше кажучи. Кров методом ПЛР досліджують, якщо хочуть визначити гепатит, токсоплазмоз та ВІЛ. Робиться аналіз ПЛР на мононуклеоз та цитомегаловірус шляхом вилучення мазка із зіва. Полімеразну ланцюгову реакцію на наявність легеневих інфекцій проводять з наявністю такого біоматеріалу, як мокротиння або плевральна рідина.
ПЛР при вагітності роблять, якщо є підозра на наявність внутрішньоутробних інфекцій, а також хвороб та патологій нервової системи плода. Як біоматеріал для дослідження беруть у вагітної тканини плаценти. Якщо у людини ураження нервової системи, досліджують спинномозкову рідину. Для визначення такої бактерії як хелікобактер пілорі, використовують біоптати шлунка та дванадцятипалої кишки.
Аналіз сечі ПЛР теж використовується нерідко, але він менш кращий, ніж аналіз крові. Він дозволяє побачити наявність патогенних мікроорганізмів, що провокують інфекційні захворювання, але не може вказати точну їх кількість та ступінь розвитку недуги. ПЛР сечі використовують, якщо немає можливості з якихось причин вилучити кров або зробити мазок. Також слід зазначити, що ПЛР сечі може проводитися для дослідження інфекцій у маленьких дітей. Аналіз сечі дозволяє також визначити наявність інфекції та запалення у сечовому міхурі, визначити каміння, пісок, а також цистит та уретрит.
Як уже згадувалося вище, здати аналіз на ПЛР можна за наявності будь-якого біоматеріалу. ПЛР аналіз, що це таке, вам відомо, потрібно знати ще й підготовку до діагностики. Від того, що має бути вилучено, безпосередньо залежить підготовка, наприклад, здавати сечу потрібно після ретельної гігієни статевих органів у ранковий час. Кров здають натщесерце, під час здачі вірніше, напередодні, необхідно відмовитися від вживання будь-яких медикаментозних препаратів. Якщо є хронічні недуги, то список дозволених препаратів для вживання вирішується індивідуальним лікарем.
Аналіз калу здають у ранковий час після ретельної підготовки. Напередодні здачі необхідно відмовитися від важкої їжі і провести ретельну гігієну статевих органів. Аналіз калу буде недостовірним, якщо біоматеріал був вилучений за допомогою клізми, необхідно природне сходження матеріалу. Підготовка до здачі слини не потрібна, достатньо виявитися від куріння, вживання цитрусового соку.
Перед здаванням біоматеріалу на визначення захворювань, що передаються при сексі, пацієнтам потрібно виключити статеві контакти за два дні до ПЛР діагностики. Жінкам здавати мазок із шийки матки заборонено під час критичних днів через два дні після місячних, інакше ПЛР розшифровка матиме спотворені відомості.
Результати скринінгу
Детально пояснити, що таке аналіз ПЛР говорить про стан того чи іншого пацієнта, може винятково кваліфікований лікар, самостійно зрозуміти дані, вказані у бланку, буде непросто. Якщо ви попросите лікаря-розшифруйте дані, то він насамперед скаже, чи позитивний результат, чи негативний. Якщо аналіз негативний – значить людина здорова, і жодних бактерій у досліджуваному матеріалі не виявлено. У разі позитивного результату, вказується точний тип збудника та його кількість, можна дізнатися також точний період, коли було зараження наявністю певних імуноглобулінів.
Існує кілька класів імуноглобулінів, що можуть чітко відобразити стан пацієнта:
- IgG розвиваються в крові в полі 4 тижнів зараження і можуть зберігатися в крові до декількох років. Вони не завжди є показниками бактерій, часом вони ступають як пам'ять організму про те, що коли він стикався з подібним типом збудника.
- IgM – з'являються на самому початку після зараження. Як правило, вони помітні вже на 5 добу, це перші захисники організму, що атакують бактерію. Вони зникають з крові через два тижні. Якщо вони присутні в аналізі крові, можна припустити, що зараження відбулося зовсім недавно, приблизно тиждень тому.
- IgA сигналізують про гострий розвиток бактеріальної інфекції в організмі або про рецидивуючу стадію хронічної недуги.
Є ряд випадків, коли аналіз показує позитивний результат, але людина зовсім не почувається погано. Це зовсім не говорить про помилку проведення діагностики, скоріше має місце хронічна форма недуги, яка знаходиться в сплячому стані або розвиток хвороби тільки починається. В цей час немає достатньої кількості бактерій, що можуть спровокувати симптоматику.
Тепер принцип аналізу вам відомий, і ви зможете звернутися по цю діагностику, якщо з'явиться найменша підозра на інфекційне захворювання. Від того, наскільки швидко ви пройдете діагностику, яка є практично безболісною, залежить тривалість подальшого лікування та його ефективність. Щоб постійно підтримувати своє здоров'я на хорошому рівні, рекомендовано щорічно проходити профілактичну ПЛР діагностику на наявність ЗПС, а також інфекцій інших органів. Краще попередити захворювання, аніж потім боротися з його наслідками.
Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) – метод високої точності в області діагностування спадкових патологій, інфекцій, вірусних хвороб у будь-якій стадії (гострої чи хронічної), а також – на ранньому етапі – до очевидних проявів хвороби шляхом ідентифікації збудників, на основі їх ДНК, РНК , що є генетичним матеріалом, у пробах, які отримують від пацієнта І сьогодні ми поговоримо про суть, етапи діагностики та принципи методів полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), а також про її вартість.
Що таке полімеразна ланцюгова реакція
Основа аналізу - ампліфікація (подвоєння) - створення безлічі копій з короткої ділянки ДНК (дезоксирибонуклеїнової кислоти), що представляє генетичний комплекс людини. Для дослідження потрібна дуже мала кількість фізіологічної речовини (мокрота, калові маси, зіскрібок епітелію, сік простати, кров, сперма, навколоплідні води, слиз, тканина плаценти, сеча, слина, рідина плевральна, цереброспінальна). При цьому, наприклад, сечостатевому тракті хворого можливе виявлення навіть одиничного шкідливого мікроба.
Методику ПЛР (полімеразної ланцюгової реакції) розробив американський вчений К. Мюллісом, який у 1993 отримав Нобелівську премію.
Активно використовується:
- у ранньому діагностуванні інфекцій, генетичних, ;
- у судово-медичній експертизі за наявності для дослідження вкрай малої кількості ДНК;
- у ветеринарній медицині, фармацевтиці, біології, молекулярній генетиці;
- для ідентифікації особи за ДНК, підтвердження батьківства;
- у палеонтології, антропології, екології (при відстеженні якості продуктів, факторів довкілля).
Про те, що таке полімеразна ланцюгова реакція, розповість у подробицях дане відео:
Кому її призначають
Полімеразна ланцюгова реакція в діагностиці інфекційних захворювань - одна з найбільш надійних методик особливої точності та достовірності. Наприклад, достовірність проведеного аналізу ПЛР на хламідії та багато інших патогенів наближається до 100% (абсолютна). Найчастіше процедуру полімеразної ланцюгової реакції призначають пацієнтам, у яких при діагностуванні виникають складнощі з ідентифікацією конкретного збудника.
Лабораторний тест ПЛР застосовують:
- для виявлення хвороботворних організмів, що викликають інфікування сечовивідних та статевих органів, що важко ідентифікуються при використанні посівів або методів імунології;
- для повторного діагностування ВІЛ на початковій стадії у разі позитивного, але спричиняючого сумніву результату первинного аналізу (наприклад, у новонароджених від інфікованих СНІДом батьків);
- для встановлення онкологічного захворювання на ранньому етапі (вивчення мутацій онкогенів) та індивідуальної корекції схеми лікування у конкретного пацієнта;
- з метою раннього виявлення та потенційного лікування спадкових патологій.
Так, майбутні батьки здають аналіз, щоб дізнатися, чи є вони носіями генетичної патології, у дітей ПЛР визначає ймовірність схильності до хвороби, що передається у спадок.
- для виявлення патологій плода на ранньому терміні виношування (окремі клітини ембріона, що росте, досліджують на наявність можливих мутацій);
- у пацієнтів перед трансплантацією органів – для «тканинного типування» (визначення сумісності тканин);
- для виявлення небезпечних патогенних організмів у донорській крові;
- у новонароджених малюків – виявлення прихованих інфекцій;
- для оцінки результатів антивірусного та антимікробного лікування.
Навіщо проходити таку процедуру
Оскільки ПЛР – високоефективний спосіб діагностики, що дає майже 100% результат, процедуру використовують:
- для підтвердження чи виключення остаточного діагнозу;
- швидкої оцінки ефективності терапії.
У багатьох випадках ПЛР - єдино можливий тест для виявлення захворювання, що розвивається, якщо інші бактеріологічні, імунологічні та вірусологічні методики діагностування виявляються марними.
- Віруси виявляються за допомогою процедури ПЛР відразу після інфікування та до появи ознак хвороби. Раннє виявлення вірусу дає змогу оперативно призначити лікування.
- Так зване "вірусне навантаження" (або - кількість вірусів в організмі) також визначається при аналізі ДНК кількісним методом.
- Конкретні хвороботворні організми (наприклад, туберкульозну паличку Коха) складно та надто довго культивувати. Аналіз ПЛР дозволяє швидко виявити мінімальну кількість патогенів (живих та мертвих) у зразках, зручних для дослідження.
Детальний аналіз ДНК патогену використовується:
- щоб визначити його чутливість до конкретних видів антибіотиків, що дозволяє негайно розпочати лікування;
- щоб контролювати поширення епідемій серед свійських, диких тварин;
- щоб виявити та відстежувати нові заразні види мікробів та підтипи патогенів, які спровокували попередні епідемії.
Види діагностики
Стандартний метод
Аналіз полімеразно-ланцюгової реакції проводиться на основі багаторазової ампліфікації (подвоєння) конкретного фрагмента ДНК та РНК при використанні спеціальних ферментів-праймерів. В результаті ланцюжка копіювання виходить кількість матеріалу, достатню для дослідження.
У ході процедури копіюється лише фрагмент, що шукається (відповідний заданим конкретним умовам) і у разі, якщо він дійсно присутній в пробі.
Про те, як проходить ПЛР, розповідає це докладне відео з корисними схемами:
Інші методи
- ПЛР, що проводиться в режимі реального часу. У цьому виді дослідження процес виявлення заданого фрагмента ДНК запускається після проходження кожного циклу, а не після здійснення всього ланцюжка 30 - 40 циклів. Цей вид дослідження дозволяє отримати інформацію про кількість патогену (вірусу чи мікроба) в організмі, тобто здійснювати кількісний аналіз.
- ВІД-ПЛР (режим зворотної транскрипції). Цей аналіз використовують для того, щоб знайти РНК з одним ланцюжком для виявлення вірусів, генетичною базою яких є саме РНК (наприклад, вірус гепатиту С, імунодефіциту). При такому дослідженні використовується спеціальний фермент - зворотна транскриптаза і певний праймер і основі РНК будується одноланцюгова ДНК. Потім із цього ланцюжка відновлюють другий ланцюг ДНК і виконується стандартна процедура.
Показання для проведення
Процедура ПЛР застосовується у клініці інфекційних хвороб, неонатології, акушерстві, педіатрії, урології, гінекології, венерології, неврології, нефрології, офтальмології.
Показання до призначення аналізу:
- з'ясування ризику розвитку генетичних відхилень у дитини за ймовірності спадкових патологій;
- діагностування обох батьків при плануванні вагітності або тяжкому стані матері при вагітності;
- проблеми із зачаттям, виявлення причин безпліддя;
- підозра на статеві інфекції у гострій стадії та при симптоматиці переходу їх у хронічну;
- виявлення причин запальних процесів неясного походження;
- незахищені випадкові та постійні статеві контакти;
- визначення чутливості патогенного мікроорганізму до конкретних антибіотиків;
- пацієнтам із підозрою на приховану інфекцію для виявлення патогенів до розвитку явної симптоматики (доклінічне діагностування);
- хворим на підтвердження одужання після хвороби (ретроспективна діагностика);:
Також використовується діагностика при необхідності точного виявлення наступних збудників:
- віруси гепатиту (A B C G), імунодефіциту людини, цитомегаловірус;
- вібріон холерний;
- вірус простого герпесу; герпетиформні види;
- ретро – адено – та риновіруси;
- віруси краснухи, Епштейна-Барр, варіцелла (Зостер – вірус);
- парво - та пікорновіруси;
- бактерія Helicobacter pylori;
- легіонели, патогенні типи палички кишкової;
- стафілокок золотистий;
- збудник;
- клостридії, дифтерійна та гемофільна паличка;
Використовується для визначення інфекцій:
- інфекційний мононуклеоз;
- бореліоз, листериоз, кліщовий енцефаліт;
- кандидоз, що викликається грибками Candida;
- статеві інфекції – трихомоніаз, уреаплазмоз, бліда трепонема, гарднереллез, гонорея, мікоплазмоз, хламідіоз;
- туберкульоз.
Протипоказання щодо
Оскільки процедура проводиться не з пацієнтом, без будь-якого впливу на організм, а з біологічним матеріалом, взятим для дослідження, то жодних протипоказань для ПЛР немає через відсутність потенційної небезпеки.
Однак забір біоматеріалу з шийного каналу матки не проводять після процедури кольпоскопії. Здача мазків, зіскрібків на аналіз дозволена лише через 4 – 6 днів після закінчення менструації та повного припинення виділень.
Чи безпечний метод
Жодний негативний вплив на пацієнта при ізольованому дослідженні його біоматеріалу в лабораторних умовах неможливий.
Підготовка до процедури (здавання біологічних речовин на аналіз)
Як зразок для аналізу ПЛР, при якому виявляють ДНК чужорідного патогену, є будь-яка біологічна рідина, тканина, виділення організму. Забір досліджуваної речовини проводять у вигляді взяття крові з вени, зіскрібка з гортані, порожнини носа, сечівника, плевральної порожнини, шийки матки.
Перед діагностичною процедурою лікар пояснює пацієнту, забір якого матеріалу буде взято:
- При обстеженні на статеві інфекції проводиться забір виділень із статевих органів, сеча, мазок з уретри.
- При аналізі на герпетичні інфекції, цитомегаловірус, мононуклеоз – беруть на аналіз сечу, мазок із зіва, гепатит, токсоплазмоз - кров із вени.
- З метою діагностування різних видів проводиться забір спинномозкової рідини.
- У пульмонології зразки для аналізу - мокротиння та плевральна рідина.
- Коли проводять дослідження можливих внутрішньоутробних інфекцій при виношуванні плода для аналізу використовують навколоплідні води та клітини плаценти.
Достовірність та точність аналізу залежить від стерильності умов під час взяття матеріалу. Оскільки дослідження ПЛР має високу чутливість, будь-яке забруднення досліджуваної речовини здатне спотворювати результат.
Грамотна підготовка до здачі біоматеріалу не становить для пацієнтів жодних труднощів. Є певні рекомендації:
- при аналізі на статеві інфекції:
- виключити інтимні контакти за 72 години до здавання матеріалу;
- припинити використання будь-яких вагінальних засобів за 3 доби;
- з вечора попереднього дня не проводити гігієну області, що досліджується;
- виключити сечовипускання за 3 – 4 години під час взяття проби з уретри;
- припинити прийом антибіотиків за місяць до здавання аналізів на інфекції;
- кров здають вранці до їди та пиття;
- збирання першої ранкової порції сечі проводиться в стерильний контейнер після ретельного інтимного туалету.
Про те, як проводиться діагностика за методикою полімеразної ланцюгової реакції, читайте нижче.
Як проходить процедура
При виконанні дослідження ПЛР щоразу в реакторі (ампліфікатор або термоциклер) повторюються певні цикли:
- Перший крок – денатурація. Слину, кров, біоптат, гінекологічні проби, мокротиння, в яких підозрюється присутність ДНК (або РНК) патогену, поміщають в ампліфікатор, де відбувається нагрівання матеріалу та розщеплення ДНК на два окремі ланцюжки.
- Другий крок – відпал або невелике охолодження матеріалуі додавання щодо нього праймерів, здатних розпізнавати необхідні ділянки у молекулі ДНК і зв'язуватися із нею.
- Третій крок – елонгація- відбувається після приєднання 2 праймерів до кожного з ланцюжків ДНК. В ході процесу фрагмент ДНК патогену добудовується, і формується копія.
Ці цикли повторюються на кшталт «ланцюгової реакції», щоразу призводячи до подвоєння копій специфічного фрагмента ДНК (наприклад, відрізка, де запрограмований певний вірус). За кілька годин утворюється безліч копій фрагмента ДНК, і виявляється їхня присутність у зразку. Після цього проводять аналіз та порівняння результатів з даними бази різних видів патогенів, щоб визначити вид інфекції.
Про розшифровку результатів та висновок виходячи з ПЛР-реакції читайте нижче.
Розшифровка результатів
Остаточний результат дослідження видається через 1 – 2 доби після здавання біологічного матеріалу. Нерідко – вже першу добу після аналізу.
Якісний аналіз
- Негативнийрезультат означає, що в речовині, зданій на дослідження, слідів збудників інфекції не виявлено.
- Позитивнийрезультат означає виявлення патогенних вірусів або бактерій у біологічному зразку з дуже високим ступенем точності на момент здачі матеріалу.
Якщо результат позитивний, але ознак активізації інфекції не виявлено – такий стан організму називають безсимптомним здоровим носієм. Найчастіше спостерігається під час взяття біоматеріалу з певного місця (цервікальний канал, уретра, порожнина рота) при вірусних захворюваннях. Лікування в цьому випадку не потрібне, але обов'язкове постійне лікарське спостереження, оскільки існує ймовірність:
- поширення вірусу від носіїв та зараження здорових людей;
- активізації процесу та перехід захворювання на хронічну форму.
Однак – якщо позитивним є аналіз крові, це вказує на те, що інфекція вразила організм, і це вже не стан носійства, а патологія, яка потребує негайної специфічної терапії.
Кількісний аналіз
Кількісний результат визначає фахівець для певного виду інфекції. На його підставі можна оцінити рівень розвитку, стадію хвороби, що дає можливість оперативно призначити правильне лікування.
Середня вартість
Ціни на проведення полімеразної ланцюгової реакції визначають: вид дослідження, складність ідентифікації збудника, складність забору біологічного матеріалу, вид аналізу (якісний чи кількісний), рівень цін у лабораторії.
З іншого боку, для дослідження ПЛР можна визначити відразу кілька патогенів при заборі одного виду матеріалу для аналізу. Це дозволяє заощадити на інших лабораторних аналізах.
Орієнтовно, вартість аналізу ПЛР у рублях:
- гонокок, гарднерелла, трихомонада вагіналіс – від 180
- хламідія трахоматис - від 190
- папіломавірус – від 380 до 500
- біоценоз урогенітального тракту у жінок (кількісна та якісна оцінка мікрофлори) – від 800.
Ще більше корисної інформації щодо дослідження ПЛР міститься у відеосюжеті нижче:
У сучасній медицині проведення ПЛР аналізу біологічних рідин організму є високоточним та інформативним. За допомогою даного аналізу виявляють наявність в організмі вірусних та мікробних частинок, навіть якщо хвороби протікають приховано та не дають жодних симптомів.
Що означає призначення ПЛР аналізу? Ця абревіатура розшифровується як метод полімеразної ланцюгової реакції – це особливий спосіб проведення лабораторних досліджень. При цьому методі отриманий від пацієнта біологічний матеріал розміщується у спеціальному апараті. До досліджуваного середовища додають набір ферментів-реактивів, які допомагають відтворювати генетичний матеріал збудника (вірусу чи мікроба). При реакції відтворюється велика кількість копій ДНК або РНК, що дозволяє ідентифікувати порівняння з базою даних як вірусну, так і мікробну інфекцію.
Що означає результат ПЛР аналізу? Якщо в організмі людини є збудник будь-яких інфекцій, навіть прихований, при цьому аналізі буде виявлено не тільки його наявність, але і в якій кількості інфекція присутня в тілі.
Для аналізу на інфекції методом ПЛР можна дослідити всі біологічні рідини організму – кров, сеча, слина, виділення статевих органів, слиз горла та носа. Для аналізу потрібно зовсім небагато матеріалу, тому що якщо збудники є, за рахунок відтворення їх копій, концентрація генетичної інформації доводиться до такої, яка виявить мікроб або вірус, і визначить його вигляд. Точність аналізу ПЛР дуже висока, за допомогою даного аналізу можна на сьогодні визначити практично всі поширені вірусні, мікробні та інші інфекції.
Але що ж найчастіше виявляє аналіз ПЛР? До списку інфекцій, які можна виявити даним методом, можна віднести інфекційні, у тому числі й соціально небезпечні інфекції за типом туберкульозу або гепатитів В і С. Цим же методом можна виявити ВІЛ-інфекцію, хламідійну та уреаплазмову інфекції, мікоплазмоз як респіраторної системи, так і генітальний. За допомогою цього аналізу виявляють молочницю, бактеріальний вагіноз, трихомоніаз. Можливості даного методу дозволяють виявляти приховані інфекції – герпес різних типів, ВПЛ (папіломавірус), а також виявлення особливого мікроба, відповідального за розвиток виразок шлунка – гелікобатера.
Сьогодні здати аналіз методом ПЛР можна практично у будь-якій приватній чи державній лабораторії. Дані види аналізів проводять усім, дітям та дорослим. Залежно від того, яку мету має аналіз, в залежності від статі проводяться аналіз різного біологічного матеріалу.
Так, аналіз ПЛР у чоловіків проводить по крові або сечі, секрету уретри, слизу з глотки чи носа, соку простати чи навіть спермі. Проведення аналізу ПЛР у жінок можливе в крові та сечі, вагінальному секреті, виділеннях з уретри, слизу носа та глотки.
Дуже часто застосовують аналіз ПЛР при вагітності, з його допомогою у секреті піхви або крові виявляють приховані інфекції, що вимагають особливого спостереження в цей період, а іноді і адекватного лікування.
ПЛР як беруть аналіз
Аналіз на інфекції даним методом призначає лікар, найчастіше збір матеріалу проводиться одразу в кабінеті лікаря – уролога чи гінеколога. Як проводиться аналіз ПЛР?
Досліджуваний матеріал у лабораторії змішують з реактивами і чекають на реакцію. За наявності збудників, копії їхньої ДНК або РНК розмножуються. Виявлені фрагменти генетичного матеріалу апарат порівнює з базами даних та точно виявляє збудника інфекції. При необхідності також вказується і кількість збудника в тих чи інших рідинах тіла. Зазвичай дослідження триває трохи більше 1-2 діб, за необхідності - проводять експрес-аналізи.
Звідки беруть аналіз ПЛР? Це залежатиме від того, які види збудника передбачаються. Якщо це ВІЛ чи гепатити – береться кров, якщо це статеві інфекції – береться мазок з уретри чи піхви. При підозрі на мононуклеоз чи герпес беруть мазок із горла. Також можуть використовуватися сеча, спинномозкова рідина, що відокремлюється з ран, мокротиння тощо.
Аналіз крові ПЛР
Для точних результатів та діагностики інфекцій важливо здавати кров у ранкові години натще. Аналіз крові методом ПЛР здатний виявити збудників небезпечних захворювань – ВІЛ, гепатити, сифіліс. У періоди загострення та активності вірусу в крові можуть бути виявлені віруси герпесу, папіломи та деякі інші.
ПЛР аналіз: підготовка
Для абсолютної точності аналізу важливою є правильна до нього підготовка. Найпростіше підготуватися до аналізу крові, жодних обмежень у дієті чи активності немає, кров потрібно здати вранці, натще. Аналіз сечі здають після підмивання геніталій із середньої порції в спеціальний стерильний контейнер. Аналіз ПЛР зі статевих шляхів заслуговує на особливу увагу, тому важливо знати, як підготуватися. За добу до обстеження забороняється секс перед дослідженням рекомендовано не мочитися. При менструації у жінок дата аналізу переноситься на 3-5 днів з моменту останніх виділень.
Скільки часу робиться аналіз ПЛР
Аналіз залежно від можливості лабораторії може готуватися від кількох годин за кілька днів. У середньому, скільки днів проводиться аналіз ПЛР? Зазвичай це одна-дві доби. При екстреній ситуації аналіз може бути виконаний цього ж дня, за кілька годин.
У більшості випадків пацієнтам доводиться стикатися з такою ситуацією, коли для обстеження чи визначення захворювання потрібна ПЛР діагностика. Важливо розуміти, що вона є і для чого необхідна.
Метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) – це таке дослідження, яке допомагає визначити багато захворювань на початкових етапах розвитку. Суть його полягає у знаходженні ДНК або РНК присутнього в організмі патогену. ПЛР дозволяє визначити збудник у випадках, коли інші види дослідження неефективні.
Популярність даного методу полягає у простоті та широті використання. Він застосовується клініцистами для діагностики різноманітних захворювань. Дозволяє швидко проводити складні кількісні та геномні дослідження.
Одним із найважливіших медичних застосувань класичного методу ПЛР є виявлення мікроорганізмів, які здатні викликати патологічні стани.
Суть аналізу ПЛР
ПЛР діагностика (що це таке, пояснюється молекулярною біологією) є методом молекулярного клонування, що використовується для аналізу короткої послідовності ДНК, яка присутня в мінімальних кількостях у зразках, які містять будь-який генетичний матеріал. Цей метод часто називають «копіювальним апаратом ДНК».
ПЛР діагностика здійснюється in vitro (поза тілом) у лабораторії та заснована на природному процесі подвоєння ДНК перед її розподілом. Крім можливості виявити вірус, бактерію чи інші мікроорганізми у зразку, ПЛР дозволяє ідентифікувати їх кількість.
При таких захворюваннях, як зараження вірусом гепатиту С або вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ), вірусне навантаження є добрим показником того, на якому етапі знаходиться захворювання та наскільки ефективною є терапія.
Збройні цією інформацією лікарі можуть визначити, коли слід починати лікування, а також контролювати сам процес. Це дозволяє скласти індивідуальний підхід кожного пацієнта.
ПЛР діагностика включає три етапи, у кожному з яких кількість ДНК-мішені збільшується у рази. В результаті такої реакції виходить більше одного мільярда копій вихідної або цільової ДНК, що і дозволяє оцінити присутність вірусу в організмі. Це і є основною властивістю методу ПЛР.
Переваги та недоліки методу
ПЛР діагностика (що це таке, розказано вище) була докладно описана Кері Муллісом у 1983 році. З того часу метод користується величезною популярністю у лабораторній практиці.
Основними перевагами такого виду дослідження є:
- універсальність;
- швидкість результатів;
- висока ймовірність одержання достовірних результатів;
- специфічність;
- різноманітність захворювань, які можна визначити.
Універсальність методу ПЛР полягає у можливості використання будь-яких фізіологічних матеріалів людини. Навіть одного волосся достатньо для аналізу.
Процес обробки даних, завдяки автоматизації, може тривати кілька годин. Специфічність полягає у виділенні певного ДНК-фрагменту, характерного для конкретного збудника. За допомогою ПЛР-аналізу може бути діагностовано багато захворювань, як у стадії загострення, так і в стадії прихованої течії.
Але, незважаючи на величезну кількість переваг, метод діагностики ПЛР має й недоліки:
- ймовірність хибнопозитивних результатів;
- висока чутливість;
- мінливість мікроорганізмів.
Основний недолік методу полягає в нездатності ПЛР відрізнити живі мікроорганізми від загиблих.. Як правило, це стосується ситуації, коли слід оцінити успішність лікування. У цьому випадку, якщо хворобу пролікували, то мертві клітини ще деякий час перебувають в організмі людини і для повного її оновлення потрібен деякий час від 4 до 6 тижнів.
Висока чутливість є перевагою і водночас недоліком. Деякі мікроорганізми у малій кількості присутні в організмі. Тому в цьому випадку цей метод діагностики не є інформативним і рекомендується застосовувати інші типи дослідження.
Будь-які мікроорганізми здатні мутувати. І навіть незважаючи на те, що в процесі ампліфікації використовується специфічний фрагмент, який найменш схильний до змін, він все одно може набувати мутації і ставати невидимим для тест-системи. Така ситуація пояснює той факт, що різні системи лабораторних аналізів можуть показувати різні результати.
У яких сферах використовується метод
Дослідження ПЛР може застосовуватись у клінічній практиці для ідентифікації різних захворювань. Широко використовується в гінекології, урології, гастроентерології, онкології та ін. Крім того, він ефективно застосовується в криміналістиці для встановлення особистості та при встановленні батьківства.
Даний тип дослідження використовується на етапі планування та під час вагітності. Аналіз TORCH-інфекції проводиться для того, щоб виявити присутність інфекції в організмі жінки. Захворювання, спричинені однією з інфекцій, можуть протікати у легкій формі для жінки, але викликати серйозні вроджені дефекти плода, аж до його загибелі.
Також метод ПЛР діагностики допомагає визначити генетичну схильність людини до розвитку певних захворювань у майбутньому.
Які інфекції виявляє діагностика методом ПЛР
Метод ПЛР допомагає виявити віруси, бактерії та грибки.
Найбільш поширені хвороби, які можна діагностувати за його допомогою:
Які біологічні матеріали досліджуються
Враховуючи захворювання, симптоми та цілі дослідження ПЛР-діагностика може використовувати будь-яку рідину фізіологічного характеру або частинку тканини.
Це може бути:
- кров;
- слина;
- мокротиння;
- сеча;
- випорожнення;
- мазок із ротоглотки;
- шматочок ураженої тканини;
- синовіальна рідина;
- зіскрібок з піхви у жінок або з уретри у чоловіків;
- еякулят;
- волосся та інші.
При захворюваннях сечостатевої системи береться сеча, мазок із піхви у жінок або з уретри у чоловіків. Венозна кров здається для діагностики таких захворювань, як ВІЛ, гепатити різних типів, TORCH-інфекції. 
Щоб виключити або підтвердити онкологію, під час хірургічних втручань вилучаються шматочки тканини на біопсію.
Як підготуватися до аналізу
Особливості підготовки до дослідження залежить від біоматеріалу, який здається. Також слід пам'ятати, що необхідно виключити прийом антибіотиків та інших медикаментозних засобів. Для контролю ефективності лікування слід витримати інтервал після прийому препаратів щонайменше 4 тижнів.
Кров здається з ранку натще. Сеча і кал повинні бути поміщені у призначений для цього абсолютно стерильний контейнер. При цьому перед збиранням сечі необхідно провести гігієну зовнішніх статевих органів.
Якщо здається мазок, необхідно:
- не мочитися протягом 3-х годин;
- не рекомендується підмиватися та спринцюватись напередодні (для жінок);
- за добу припинити статеве життя;
- жінкам мазок слід здавати у середині циклу.
Етапи ПЛР-дослідження
Перед початком ПЛР ДНК повинна бути виділена зі зразка. Виділення ДНК є багатоступеневим процесом, який може бути виконаний вручну або інструментально.
Після підготовки зразка починається триступеневий процес ПЛР:
- поділ цільової ДНК (денатурація);
- ампліфікація (розмноження) ДНК-фрагментів;
- детекція (виявлення) ампліфікованих фрагментів ДНК
Перший етап ПЛР має назву денатурація.Суть його у тому, що пробірку з ДНК зразками нагрівають до високих температур (приблизно 90 градусів). Через високі температури руйнуються слабкі зв'язки між нуклеотидами, що утворюють код молекул. Внаслідок цього відбувається поділ дволанцюгової ДНК або РНК на дві окремі нитки. 
Для «чистоти» дослідження досліджуваний біоматеріал додається спеціальний розчин, який розчиняє органічні речовини. Тривалість цього етапу залежить від виду досліджуваного матеріалу та збудника інфекції.
ПЛР діагностика (що це таке описано вище) на другому етапі здійснює розмноження ДНК-фрагментів на основі самої ДНК інфекції. ПЛР не копіює всю нуклеїнову кислоту у зразку. Він копіює лише особливу послідовність генетичного коду, короткий фрагмент (праймер).
З другого краю етапі пробірка охолоджується.Весь процес ПЛР автоматизується за допомогою машини, яка називається термостатом або ампліфікатором, і може бути завершений протягом декількох годин. Машина ПЛР запрограмована зміну температури реакційної суміші кожні кілька хвилин. Це відбувається для того, щоб короткі фрагменти змогли зв'язатися з одноланцюжковою матрицею.
Ампліфікація відбувається у 30-40 циклів. У цей період лікар-лаборант копіює ДНК-фрагмент та збільшує його кількість методом ланцюгової реакції. Таким чином, з кожним циклом кількість копій зростає до декількох мільйонів або навіть мільярдів.
У третій фазі дослідження відбувається виявлення присутності ДНК вірусів та бактерій.Це здійснюється шляхом розподілу отриманої суміші та додавання до неї спеціального розчину. Ця рідина дозволяє фрагментам ДНК набувати певного забарвлення під дією ультрафіолетових променів. Це і є індикатором того, що патогенні мікроби присутні в організмі людини.
ПЛР під час вагітності
ПЛР діагностика (що таке, описано вище) вперше може призначатися при вагітності, оскільки є обов'язковою процедурою. Цей метод допомагає виявити приховані інфекції та загрозу розвитку вад у плода.
Для проведення аналізу використовують:
Існують захворювання інфекційного характеру, які можуть негативно впливати на розвиток плода, викликаючи вади, стати причиною передчасних пологів та викиднів. Вони особливо небезпечні в першому триместрі вагітності і, як правило, є медичним показанням для переривання вагітності. Ці інфекції мають загальну назву TORCH-комплексу.
Аналіз ПЛР допомагає встановити наявність чи відсутність інфекції в організмі вагітної жінки. Найчастіше проводиться на етапі планування вагітності або у першому триместрі. У разі позитивного результату потрібно повторне проведення дослідження. І лише після підтвердження результатів призначається відповідне лікування.
ПЛР для діагностики ВІЛ
Метод ПЛР для діагностики ВІЛ-інфекції є дорогим аналізом та використовується за особливими показаннями. До них належать донорство, а також він може бути призначений пацієнтам, які постраждали в автомобільній аварії з людьми, носіями ВІЛ.
ПЛР допомагає встановити наявність інфекції на ранніх термінах до того, як організм виробить антитіла до ВІЛ. Результат із високим відсотком ймовірності дослідження може показати вже через 5-14 днів після проникнення вірусу. 
В інших випадках наявність вірусу в організмі людини допомагає встановити імуноферментний аналіз (ІФА). Він визначає антитіла до ВІЛ у крові людини, які починають вироблятись через 1-3 місяці після зараження. Кількісне визначення аналізу мікроорганізмів необхідне контролю лікування пацієнтів.
ПЛР для діагностики гепатитів
Вірусний гепатит є важким захворюванням, яке може призвести до розвитку цирозу печінки. В інкубаційний період, який може становити до 12 місяців, вірус ніяк не проявляє себе, пацієнт практично не заразний, і вірус неможливо визначити за звичайним аналізом крові.
Найчастіше, при несвоєчасному лікуванні, захворювання перетворюється на хронічну форму і загрожує множинними ускладненнями.
При зараженні гепатитом В інкубаційний період не такий тривалий і перші симптоми можуть спостерігатися вже через 4 тижні. Саме в цей період ІФА може виявити присутність вірусу в організмі.
Метод ПЛР дозволяє:
- виявити хворобу на етапі інкубаційного розвитку;
- дозволити сумнівні аналізи інших досліджень;
- оцінити ефективність противірусної терапії
Відсутність ДНК-вірусу гепатиту після проведеного лікування є ознакою його ефективності.
Аналіз на туберкульоз
Розвиток туберкульозу провокує паличка Коха, яка може потрапити в організм людини повітряно-краплинним шляхом. Захворювання має дві форми: приховану та відкриту. У першому випадку інфікована людина не є носієм інфекції та мікобактерії у мокротинні не виявляються навіть за допомогою ПЛР. Небезпека ця форма все ж таки має, тому що здатна переходити у відкриту стадію. 
Відкрита (активна) стадія становить небезпеку оточуючих навіть у разі суворого дотримання правил особистої гігієни. Для діагностики захворювання використовують флюорографію, томографію та рентген грудної клітки. Також із цією метою застосовують шкірну туберкульовану пробу (пробу Манту). Але найефективнішим методом дослідження є ПЛР.
Як досліджувані зразки використовують:
- кров;
- мокротиння;
- рідина бронхів.
ПЛР для діагностики ВПЛ
Діагностика на ВПЛ проводиться у разі наявності симптомів захворювання таких як папіломи та бородавки в області статевих органів. Також дослідження призначається на етапі планування вагітності, у разі безпліддя, викиднів, а також у ситуації зараження одного з партнерів, оскільки один із механізмів передачі вірусу – статевий.
Найбільш небезпечним є не сама присутність вірусу в організмі, а його тип. Деякі його види (16 та 18) є високоонкогенними і можуть викликати рак шийки матки у жінок. Метод ПЛР може призначатися разом із іншими видами дослідження. Для аналізу найчастіше використовують мазок із статевих органів. Кров, сеча та виділення з піхви як біоматеріал використовуються вкрай рідко.
При герпесі
Цей тест діагностує генітальну інфекцію вірусом простого герпесу 1 та 2 типу (HSV1/HSV2). При позитивному результаті HSV2, слід пройти тест на ВІЛ та інші ЗПСШ. Для аналізу потрібна венозна кров пацієнта. 
Також може досліджуватися сеча, виділення та вміст висипів за наявності симптомів.
Комплексне обстеження ПЛР
У разі наявності показань або з метою профілактики захворювань може бути призначений комплекс аналізів методом ПЛР. Найчастіше ініціатором виступає сам пацієнт, бувають випадки, коли комплексне обстеження призначається для запобігання спалахам певних захворювань у конкретному регіоні.
ПЛР-12 – це комплексне дослідження, яке охоплює такі інфекції:
- Гепатит.
- Герпес.
- ЗПСШ.
- Туберкульоз.
- Енцефаліт.
- Кандидоз.
- Хелікобактерна інфекція.
- Цитомегаловірус.
- Мононуклеоз.
- Онковіруси.
- Лістеріоз.
Розшифровка аналізу ПЛР
Після проведення аналізу методом ПЛР може бути озвучено позитивний чи негативний результат.
Результати ПЛР діагностики виглядають так. Що це таке і як розшифрувати, розповість лікар Точність ПЛР-діагностики
Найчастіше ПЛР діагностика надає високоточні результати. Але в деяких випадках для підтвердження правильності діагнозу потрібні додаткові методи дослідження.
Через що може вийти хибний результат?
Хибнопозитивні результати можуть вийти внаслідок недотримання правил збору аналізу та проведення самої процедури дослідження.
Сам пацієнт може бути винуватцем неправдивої інформативності у разі неналежної підготовки до здачі біоматеріалу. Оснащеність лабораторії та професіоналізм лікаря безпосередньо можуть впливати на результати дослідження.
Де пройти ПЛР-діагностику
ПЛР діагностика проводиться у приватних клініках та лабораторіях за призначенням лікаря або з ініціативи самого пацієнта з метою профілактики. 
Перевагу слід віддавати клінікам та лабораторіям із сучасним обладнанням, які існують не перший рік на медичному ринку та зарекомендували себе.
ПЛР аналіз: вартість та терміни
Цей метод діагностики вирізняється високою вартістю. Його вартість коливається від 200 до 500 рублів за кожен вид. Комплексне обстеження на наявність кількох інфекцій дозволяє значно заощадити порівняно з оплатою кожного окремого дослідження.
Термін проведення дослідження залежить від типу інфекції та може зайняти від 1 до 5 днів. Також ці показники залежать від оснащеності лабораторії та кваліфікації медичного працівника.
ПЛР діагностика (про те, що це таке, докладно описано в цій статті) є найточнішим і найшвидшим методом дослідження. Вона є одним із найважливіших відкриттів у ХХ ст. у галузі медицини.
Завдяки цьому методу стало можливим повне одужання від багатьох хвороб. Але не слід забувати про те, що ПЛР має і деякі недоліки, і його ефективність іноді підвищується спільно з використанням інших методів дослідження.
Оформлення статті: Володимир Великий
Відео про ПЛР діагностику
Про точність ПЛР:
Аналіз ПЛР — найчутливіший і найточніший метод, що використовується для діагностики інфекцій, що передаються статевим шляхом. Його застосовують не тільки при ЗПСШ, але і для оцінки умовно-патогенної мікрофлори піхви, кишківника, дихальної системи. Терміни ПЛР різні для різних інфекцій та залежать від варіанта виконання аналізу: якісного чи кількісного.
Скільки готується аналіз ПЛР найбільше хвилює, звичайно, пацієнтів з венеричними захворюваннями або з підозрою на них. Тому що дуже важливо і вчасно розпочати лікування і не заразити близьких людей.
Для більшості статевих інфекцій термін виконання якісного ПЛР аналізу, який і визначає наявність тієї чи іншої інфекції, становить 1 день. За добу можна виявити хламідії, мікоплазми, уреаплазми, гарднерелли, трихомонади, гонорею, герпес, цитомегаловірус, ВПЛ, кандиду та багато інших видів мікроорганізмів, що викликають ЗПСШ. Матеріал для дослідження – це зазвичай:
- Зіскрібок з уретри, з головки статевого члена або піхви.
- Зішкріб зі слизової оболонки ротоглотки, кон'юнктиви, прямої кишки.
- Зішкріб з ерозій та виразок.
- Сеча.
- Секрет простати, сперма.
- Мокрота, слина.
Дещо довше виконуються кількісні аналізи ПЛР, які визначають не тільки збудника, але і його кількість на слизовій оболонці або в біологічній рідині. Термін такого ПЛР аналізу 2-3 дні.
ДНК діагностика ІПСШ проводиться не тільки за допомогою зіскрібків. Для низки інфекцій беруть кров і визначають наявність вірусів 1 мл. Такі дослідження необхідні для обстеження на ВІЛ, гепатити, ЦМВ, герпес-віруси, токсоплазмоз.
Скільки днів роблять ПЛР на ВІЛ хвилює не менше, ніж при діагностиці бактеріальних ЗПСШ. Справа в тому, що цей аналіз є найранішим із аналізів на СНІД/ВІЛ та показує наявність РНК вірусу імунодефіциту, коли інші аналізи ще не реагують.
Якісні ПЛР аналізи крові на ВІЛ, гепатити та інші інфекції переважно робляться до 3 днів. Кількісні можуть зайняти 5-7, іноді до 14.
Скільки готується аналіз ПЛР залежить не тільки від виду вірусу або бактерії, що виявляється, але і від лабораторії, яка його виконує. У наших клініках доставка досліджуваного матеріалу проводиться протягом кількох годин безпосередньо до лабораторії. Тому терміни ПЛР як реального часу мінімальні, а точність дослідження становить 99-100%. Аналізи наших пацієнтів проводяться лише у тих клініко-діагностичних лабораторіях, які найкраще зарекомендували себе у виконанні аналізу ПЛР.
Швидше, ніж описано в цій статті, аналіз ПЛР виконуватися не може через свою технологію, так як для вирощування ланцюжків ДНК або РНК потрібен час.
