Какво е PCR кръвен тест и защо е необходим. PCR анализ - какво е това: как и къде да преминете Колко дни правите PCR

PCR анализ, малко хора знаят какво е това, въпреки че днес това е един от иновативните методи за диагностика на инфекциозни заболявания, за които неговият разработчик получи Нобелова награда през 1993 г. Този високотехнологичен метод ви позволява да откриете сериозни заболявания на ранен етап и да започнете лечението им своевременно.

Анализът се основава на принципите на молекулярната биология. PCR изследването се състои в използването на специален ензим, който под въздействието на температурни условия копира РНК и ДНК на бактерии и вируси, присъстващи в събрания биоматериал. Такова масово размножаване позволява на лекаря да определи точно към кой вид принадлежи бактерията, провокирала заболяването, както и да измери нивото на концентрацията му в биоматериала. Процедурата по копиране се извършва в специален апарат - усилвател, който загрява и охлажда епруветките със събрания материал, създавайки удобни условия за репликация.

PCR изследването се провежда по много причини, но най-често се използва за определяне на наличието на инфекциозни заболявания като:

• херпес;
• генитални инфекции - хламидия, уреаплазмоза, бактериална вагиноза, трихомониаза;
• кандидоза;
• хепатит;
• мононуклеоза;
• листериоза;
• цитомегаловирус;
• туберкулоза;
• човешки папилома вирус;
• енцефалит, пренасян от кърлежи.

PCR анализът не е ограничен до обхвата в медицината, често се прави скрининг, ако е необходимо да се разбере кой притежава биологичния материал, открит на местопрестъплението, тоест PCR анализът се използва широко в криминалистиката. Трябва да се отбележи, че се взема намазка или кръв за PCR, ако се изисква бащинство. Резултатите от PCR диагностиката по никакъв начин не са по-ниски от обичайния анализ на ДНК родство и е много по-евтин.

Характеристики на диагностиката

PCR анализът има огромен брой положителни аспекти. На първо място е важно да се отбележи чувствителността на теста. PCR анализаторът е в състояние да определи ДНК молекулите на бактериите, дори ако те са малко на брой, т.е. лекарят получава информация за ранния стадий на заболяването или началото на хроничната форма на заболяването. PCR кръвен тест може дори да определи наличието на инфекциозно заболяване, което е в латентна форма и не се предава.

Трябва да се отбележи, че PCR анализът при мъже и жени може да се извърши в присъствието на всякакъв вид материал, не е задължително да е кръв или цитонамазка, слюнка, кожни клетки и дори урина.

Резултатите от PCR анализите могат да бъдат обширни, тъй като PCR диагностиката на инфекциите може да улови няколко патогена наведнъж, които се намират в една проба от биоматериал. Изследването може да се направи по всяко удобно време, което според анализа човек може да разбере за кратък период от време, тъй като резултатите от диагностиката на биоматериала са готови след 5 часа.

Всички лекари са съгласни, че кръвният тест за PCR или друг материал никога не дава фалшиви резултати, ако диагностичната методика се следва правилно. PCR положителен или PCR отрицателен може да бъде фалшив само при условие, че лабораторният персонал няма високо ниво на професионализъм. Ако отстраненият биоматериал е бил замърсен или съхраняван неправилно, тогава декодирането на PCR анализа може да има изкривени резултати.

Подготовка за диагностика

PCR намазка при жени се взема от шийката на матката, ако е необходимо да се идентифицират полово предавани болести, например хламидия, уреаплазма или херпес. Ако се изисква PCR да се извърши върху тези бактерии от мъж, тогава от него се взема секрет от уретрата - с други думи простатен сок. Кръвта се изследва чрез PCR, ако искат да определят хепатит, токсоплазмоза и ХИВ. Извършва се PCR анализ за мононуклеоза и цитомегаловирус чрез отстраняване на тампон от гърлото. Полимеразна верижна реакция за наличие на белодробни инфекции се извършва с наличието на биоматериал като храчка или плеврална течност.

PCR по време на бременност се прави, ако има съмнение за вътрематочни инфекции, както и заболявания и патологии на феталната нервна система. Като биоматериал за изследване се взема плацентарна тъкан от бременна тъкан. Ако човек има лезия на нервната система, се изследва цереброспиналната течност. За да се определи такава бактерия като Helicobacter pylori, се използват биопсии на стомаха и дванадесетопръстника.

Анализ на урината PCR също често се използва, но е по-малко предпочитан от кръвен тест. Той ви позволява да видите наличието на патогенни микроорганизми, които провокират инфекциозни заболявания, но не може да посочи техния точен брой и степен на развитие на заболяването. PCR на урина се използва, ако по някаква причина не е възможно да се изтегли кръв или да се направи цитонамазка. Трябва също да се отбележи, че PCR на урина може да се използва за изследване на инфекции при малки деца. Анализът на урината също ви позволява да определите наличието на инфекция и възпаление в пикочния мехур, да определите камъни, пясък, както и цистит и уретрит.

Както бе споменато по-горе, можете да вземете анализ за PCR в присъствието на всеки биоматериал. PCR анализ, какво е това, знаете, вие също трябва да знаете как да се подготвите за диагностика. Подготовката зависи пряко от това, което трябва да се оттегли, например, трябва да уринирате след задълбочена хигиена на половите органи сутрин. Кръвта се дарява на празен стомах, по време на даряването или по-скоро в деня преди това е необходимо да се откаже от употребата на каквито и да било лекарства. Ако има хронични заболявания, тогава списъкът с одобрени лекарства за употреба се определя индивидуално от лекуващия лекар.

Фекален анализ се взема сутрин след внимателна подготовка. В навечерието на раждането е необходимо да се откаже тежка храна и да се извърши цялостна хигиена на гениталните органи. Анализът на изпражненията ще бъде ненадежден, ако биоматериалът е отстранен с клизма, необходимо е естествено спускане на материала. Подготовка за доставка на слюнка не се изисква, достатъчно е да спрете да пушите, да пиете цитрусов сок.

Преди да предадат биоматериал за определяне на заболявания, които се предават по време на полов акт, пациентите са длъжни да изключат сексуален контакт два дни преди PCR диагнозата. Жените нямат право да вземат цитонамазка от шийката на матката през критичните дни два дни след менструацията, в противен случай PCR декодирането ще има изкривена информация.

Резултати от скрининга

Само квалифициран лекар може да обясни подробно какво казва такъв PCR анализ за състоянието на конкретен пациент, няма да е лесно да разберете сами данните, посочени във формуляра. Ако помолите лекаря да дешифрира данните, той първо ще каже дали резултатът е положителен или отрицателен. Ако анализът е отрицателен, тогава човекът е здрав и в тестовия материал не са открити бактерии. В случай на положителен резултат се посочва точният вид на патогена и неговото количество, можете също така да разберете точния период, когато е била инфекцията по наличието на определени имуноглобулини.

Има няколко класа имуноглобулини, които могат ясно да отразяват състоянието на пациента:

1. IgG се развиват в кръвта след 4 седмици от инфекцията и могат да персистират в кръвта до няколко години. Те не винаги са индикатори за бактерии, понякога действат като спомен на тялото, че някога е срещал подобен тип патоген.
2. IgM - появяват се в самото начало след инфекцията. По правило те вече се виждат на 5-ия ден, това са първите защитници на тялото, които атакуват бактерията. Те изчезват от кръвния резултат след две седмици. Ако те присъстват в кръвния тест, тогава може да се предположи, че инфекцията е настъпила съвсем наскоро, преди около седмица.
3. IgA сигнализира за остро развитие на бактериална инфекция в тялото или рецидивиращ стадий на хронично заболяване.

Има редица случаи, когато анализът показва положителен резултат, но човекът изобщо не се чувства зле. Това изобщо не означава грешка в диагнозата, по-скоро има хронична форма на заболяването, което е в латентно състояние, или развитието на болестта едва започва. По това време няма достатъчно бактерии, които да провокират симптоми.

Сега знаете принципа на анализа и можете да кандидатствате за тази диагноза, ако има най-малко съмнение за инфекциозно заболяване. Продължителността на по-нататъшното лечение и неговата ефективност пряко зависят от това колко бързо преминавате диагнозата, която е практически безболезнена. За да поддържате постоянно здравето си на добро ниво, се препоръчва веднъж годишно да се подлагате на превантивна PCR диагностика за наличие на полово предавани болести, както и инфекции на други органи. По-добре е да предотвратите заболяването, отколкото да се справяте с последствията от него по-късно.

Полимеразна верижна реакция (PCR) е високоточен метод в областта на диагностицирането на наследствени патологии, инфекции, вирусни заболявания на всеки етап (остър или хроничен), а също и на ранен етап - преди очевидни прояви на заболяването чрез идентифициране на патогени въз основа на тяхната ДНК, РНК, които са генетичен материал, в проби, които са получени от пациента. И днес ще говорим за същността, диагностичните етапи и принципите на методите на полимеразна верижна реакция (PCR), както и за неговата цена.

Какво е полимеразна верижна реакция

В основата на анализа е амплификацията (удвояването) - създаването на много копия от къс участък от ДНК (дезоксирибонуклеинова киселина), който представлява човешкия генетичен комплекс. За изследването е необходимо много малко количество физиологична субстанция (храчка, изпражнения, изстъргване на епитела, простатен сок, кръв, сперма, амниотична течност, слуз, плацентарна тъкан, урина, слюнка, плеврална течност, цереброспинална течност). В този случай, например, дори един вреден микроб може да бъде открит в урогениталния тракт на пациента.

Техниката PCR (полимеразна верижна реакция) е разработена от американския учен К. Мълис, получил Нобелова награда през 1993 г.

Активно използвани:

• при ранна диагностика на инфекции, генетични,;
• при съдебномедицинска експертиза при наличие на изключително малко ДНК за изследване;
• във ветеринарната медицина, фармацевтиката, биологията, молекулярната генетика;
• за идентифициране на лице по ДНК, потвърждаване на бащинство;
• в палеонтологията, антропологията, екологията (при проследяване на качеството на продуктите, факторите на околната среда).

Това видео ще ви каже какво представлява полимеразна верижна реакция:

На кого е възложено

Полимеразна верижна реакция в диагностиката на инфекциозни заболявания е един от най-надеждните методи с висока точност и надеждност. Например, надеждността на PCR анализа за хламидия и много други патогени се доближава до 100% (абсолютно). Най-често процедурата за полимеразна верижна реакция се предписва на пациенти, които при диагностициране имат затруднения при идентифицирането на конкретен патоген.

Използва се лабораторен PCR тест:

• за откриване на патогени, причиняващи инфекция на пикочните и гениталните органи, които трудно се идентифицират с помощта на култури или имунологични методи;
• за повторна диагностика на ХИВ в началния етап в случай на положителен, но съмнителен резултат от първоначалния анализ (например при новородени от родители, заразени със СПИН);
• установяване на онкологично заболяване в ранен стадий (изследване на онкогенни мутации) и индивидуална корекция на режима на лечение за конкретен пациент;
• с цел ранно откриване и евентуално лечение на наследствени патологии.

И така, бъдещите родители се тестват, за да разберат дали са носители на генетична патология, при деца PCR определя вероятността от излагане на наследствено заболяване.

• за откриване на патологии на плода на ранен етап от бременността (отделни клетки на растящ ембрион се изследват за възможни мутации);
• при пациенти преди органна трансплантация - за "тъканно типизиране" (определяне на тъканна съвместимост);
• за откриване на опасни патогенни организми в дарената кръв;
• при новородени - за откриване на латентни инфекции;
• за оценка на резултатите от антивирусно и антимикробно лечение.

Защо да преминете през тази процедура?

Тъй като PCR е високоефективен диагностичен метод, който дава почти 100% резултат, процедурата се използва:

• за потвърждаване или отхвърляне на окончателната диагноза;
• бърза оценка на ефективността на терапията.

В много случаи PCR е единственият възможен тест за откриване на развиващо се заболяване, ако други бактериологични, имунологични и вирусологични диагностични методи са безполезни.

• Вирусите се откриват чрез PCR веднага след заразяването и преди да се появят признаци на заболяване. Ранното откриване на вируса позволява своевременно лечение.
• Така нареченият „вирусен товар“ (или броят на вирусите в тялото) също се определя чрез количествен ДНК анализ.
• Специфични патогени (като туберкулозен бацил на Кох) са трудни и отнема твърде много време за култивиране. PCR анализът ви позволява бързо да идентифицирате минималния брой патогени (живи и мъртви) в проби, които са удобни за изследване.

Използва се подробен ДНК анализ на патогена:

• да се определи неговата чувствителност към определени видове антибиотици, което ви позволява незабавно да започнете лечението;
• за контрол на разпространението на епидемии сред домашните, дивите животни;
• за идентифициране и наблюдение на нови заразни микробни видове и подтипове патогени, които са подхранвали предишни епидемии.

Видове диагностика

Стандартен метод

Анализът на полимеразната верижна реакция се извършва на базата на многократна амплификация (удвояване) на специфичен ДНК и РНК фрагмент с помощта на специални праймерни ензими. В резултат на веригата на копиране се получава достатъчно количество материал за изследване.

По време на процедурата се копира само желаният фрагмент (съответстващ на зададените специфични условия), дори ако той действително присъства в пробата.

Това подробно видео с полезни диаграми разказва как работи PCR:

Други методи

• PCR в реално време. При този вид изследване процесът на идентифициране на даден ДНК фрагмент започва след всеки цикъл, а не след завършване на цялата верига от 30-40 цикъла. Този тип изследване ви позволява да получите информация за количеството на патоген (вирус или микроб) в тялото, т.е. да извършите количествен анализ.
• RT-PCR (режим на обратна транскрипция). Този анализ се използва за намиране на едноверижна РНК за откриване на вируси, чиято генетична основа е РНК (например вирус на хепатит С, вирус на имунна недостатъчност). При такова изследване се използва специален ензим - обратна транскриптаза и определен праймер, а на базата на РНК се изгражда едноверижна ДНК. След това от тази верига се възстановява втора ДНК верига и се извършва стандартната процедура.

Показания за задържане

PCR процедурата се използва в клиниката по инфекциозни болести, неонатология, акушерство, педиатрия, урология, гинекология, венерология, неврология, нефрология, офталмология.

Показания за целта на анализа:

• изясняване на риска от развитие на генетични аномалии при дете с вероятност от наследствени патологии;
• диагностика на двамата родители при планиране на бременност или тежко състояние на майката по време на продължаваща бременност;
• трудности при зачеването, идентифициране на причините за безплодие;
• подозрение за сексуални инфекции в острия стадий и със симптоми на прехода им към хронични;
• откриване на причини за възпалителни процеси с неясен произход;
• незащитени случайни и постоянни сексуални контакти;
• определяне на чувствителността на патогенен микроорганизъм към специфични антибиотици;
• пациенти със съмнение за латентна инфекция за откриване на патогени преди развитието на явни симптоми (предклинична диагноза);
• пациенти за потвърждаване на възстановяване след заболяване (ретроспективна диагноза);

Диагностиката се използва и ако е необходимо точно да се идентифицират следните патогени:

• хепатитни вируси (A B C G), човешки имунодефицит, цитомегаловирус;
• холерен вибрион;
• вирус на херпес симплекс, херпетиформен вид;
• ретро - адено - и риновируси;
• вируси на рубеола, Епщайн-Бар, варицела (Зостер - вирус);
• парво и пикорнавируси;
• бактерия Helicobacter pylori;
• легионела, патогенни видове Escherichia coli;
• Стафилококус ауреус;
• патоген;
• Clostridia, дифтерия и Haemophilus influenzae;

Използва се и за определяне на инфекции:

• Инфекциозна мононуклеоза;
• борелиоза, листериоза, енцефалит, пренасян от кърлежи;
• кандидоза, причинена от гъбички Candida;
• сексуални инфекции - трихомониаза, уреаплазмоза, бледа трепонема, гарднерелоза, гонорея, микоплазмоза, хламидия;
• туберкулоза.

Противопоказания за провеждане

Тъй като процедурата се извършва не с пациента, без ефект върху тялото, а с взет биологичен материал за изследване, няма противопоказания за PCR поради липса на потенциална опасност.

Въпреки това, след процедурата за колпоскопия не се извършва вземане на проби от биоматериал от цервикалния канал на матката. Доставянето на петна, изстъргвания за анализ е разрешено само 4 до 6 дни след края на менструацията и пълното спиране на изхвърлянето.

Безопасен ли е методът

Не е възможно отрицателно въздействие върху пациента при изолирано изследване на неговия биоматериал в лабораторията.

Подготовка за процедурата (доставяне на биологични вещества за анализ)

Като проба за PCR анализ, в който се открива ДНК на чужд патоген, се използва всяка биологична течност, тъкан, телесни секрети. Вземането на проба от тестваното вещество се извършва под формата на вземане на кръв от вена, изстъргване от ларинкса, носната кухина, уретрата, плевралната кухина, шийката на матката.

Преди диагностичната процедура лекарят обяснява на пациента какъв материал ще бъде взет:

1. При изследване за полови инфекции се вземат секрети от половите органи, урина и цитонамазка от уретрата.
2. При анализ за херпесни инфекции, цитомегаловирус, мононуклеоза - вземат урина, тампон от гърлото за анализ, за ​​хепатит, токсоплазмоза - кръв от вена.
3. За да се диагностицират различни видове, се взема цереброспинална течност.
4. В пулмологията пробите за анализ са храчка и плеврална течност.
5. Когато се провежда изследване на възможни вътрематочни инфекции по време на бременност, за анализ се използват амниотична течност и плацентарни клетки.

Надеждността и точността на анализа зависи от стерилността на условията при вземане на материала. Тъй като PCR тестът е силно чувствителен, всяко замърсяване на тестваното вещество може да изкриви резултата.

Компетентната подготовка за доставката на биоматериал не създава никакви затруднения за пациентите. Има определени препоръки:

• при анализ за сексуални инфекции:
  • изключете интимни контакти 72 часа преди доставката на материала;
  • спрете да използвате всякакви вагинални продукти за 3 дни;
  • от вечерта на предишния ден не извършвайте хигиена на изследваната зона;
  • изключете уриниране за 3-4 часа при вземане на проба от уретрата;
• спрете приема на антибиотици един месец преди тестване за инфекции;
• дарявайте кръв сутрин преди ядене и пиене;
• събирането на първата сутрешна порция урина се извършва в стерилен съд след щателна интимна тоалетна.

Прочетете повече за това как се извършва диагностиката с помощта на метода на полимеразна верижна реакция.

Как е процедурата

При извършване на PCR изследване отново и отново в реактора (усилвател или термоциклер), определени цикли се повтарят:

1. Първата стъпка е денатурация. Слюнка, кръв, биопсия, гинекологични проби, храчки, в които се подозира наличието на ДНК (или РНК) на патогена, се поставят в усилвател, където материалът се нагрява и ДНК се разделя на две отделни вериги.
2. Втората стъпка е отгряване или леко охлаждане на материала.и добавяне на праймери към него, които могат да разпознаят желаните участъци в ДНК молекулата и да се свържат с тях.
3. Третата стъпка е удължаване- възниква след добавяне на 2 праймера към всяка от ДНК веригите. По време на процеса ДНК фрагментът на патогена е завършен и се образува неговото копие.

Тези цикли се повтарят като "верижна реакция", като всеки път водят до удвояване на копия на специфичен ДНК фрагмент (например сегмент, в който е програмиран определен вирус). За няколко часа се образуват много копия на ДНК фрагмента и се установява наличието им в пробата. След това резултатите се анализират и сравняват с базата данни за различни видове патогени, за да се определи вида на инфекцията.

Прочетете за тълкуването на резултатите и заключението на базата на PCR реакцията по-долу.

Дешифриране на резултатите

Крайният резултат от изследването се издава 1-2 дни след доставката на биологичен материал. Често - още в първия ден след анализа.

Качествен анализ

• Отрицателнарезултатът означава, че в предоставеното за изследване вещество не са открити следи от инфекциозни агенти.
• Положителенрезултат означава откриване на патогенни вируси или бактерии в биологична проба с много висока степен на точност в момента на подаването.

Ако резултатът е положителен, но няма признаци на активиране на инфекцията, това състояние на тялото се нарича асимптоматично „здравословно носителство“. Най-често се наблюдава при вземане на биоматериал от определено място (цервикален канал, уретра, устна кухина) при вирусни заболявания. В този случай не се изисква лечение, но е необходимо постоянно медицинско наблюдение, тъй като има вероятност:

• разпространение на вируса от носители и заразяване на здрави хора;
• активиране на процеса и преминаване на болестта в хронична форма.

Въпреки това, ако кръвният тест е положителен, това показва, че инфекцията е засегнала тялото и това вече не е носителство, а патология, която изисква незабавна специфична терапия.

Количествен анализ

Количественият резултат се определя от специалист специално за определен тип инфекция. Въз основа на това е възможно да се оцени степента на развитие, стадия на заболяването, което позволява своевременно да се предпише правилното лечение.

средна цена

Цените за провеждане на полимеразна верижна реакция се определят от: вида на изследването, сложността на идентифициране на патогена, трудността при събиране на биологичен материал, вида на анализа (качествен или количествен), нивото на цените в лабораторията.

От друга страна, при изследването на PCR няколко патогена могат да бъдат открити наведнъж, когато се вземе един вид материал за анализ. Това спестява други лабораторни изследвания.

Приблизително цената на PCR анализа в рубли:

• gonococcus, gardnerella, trichomonas vaginalis - от 180
• хламидия трахоматис - от 190 бр
• папиломен вирус - от 380 до 500
• биоценоза на урогениталния тракт при жените (количествена и качествена оценка на микрофлората) - от 800.

За повече полезна информация относно PCR изследването вижте видеоклипа по-долу:

В съвременната медицина PCR анализът на телесни течности е много точен и информативен. С помощта на този анализ се открива наличието на вирусни и микробни частици в тялото, дори ако заболяванията са скрити и не дават никакви симптоми.

Какво означава за вас назначаването на PCR анализ? Това съкращение означава метод на полимеразна верижна реакция - това е специален начин за провеждане на лабораторни изследвания. При този метод биологичният материал, получен от пациента, се поставя в специален апарат. Към изследваната среда се добавя набор от реактивни ензими, които спомагат за възпроизвеждането на генетичния материал на патогена (вирус или микроб). Реакцията възпроизвежда голям брой копия на ДНК или РНК, което прави възможно идентифицирането както на вирусни, така и на микробни инфекции чрез сравнение с базата данни.

Какво означава резултатът от PCR анализ? Ако в човешкото тяло има причинител на каквито и да било инфекции, дори и скрити, този анализ ще разкрие не само неговото присъствие, но и колко тази инфекция присъства в тялото.

За да анализирате за инфекции чрез PCR, можете да изследвате всички биологични течности на тялото - кръв, урина, слюнка, генитален секрет, слуз от гърлото и носа. Необходим е много малко материал за анализ, тъй като ако има патогени, чрез възпроизвеждане на техните копия концентрацията на генетична информация се довежда до такова ниво, че да разкрие микроб или вирус и да определи неговия тип. Точността на PCR анализа е много висока, днес с помощта на този анализ могат да се определят почти всички широко разпространени вирусни, микробни и други инфекции.

Но какво най-често разкрива PCR анализът? Списъкът на инфекциите, които могат да бъдат открити чрез този метод, включва инфекциозни, включително обществено опасни инфекции като туберкулоза или хепатит В и С. Същият метод може да открие ХИВ инфекция, хламидийни и уреаплазмени инфекции, микоплазмоза както на дихателната система, така и на половите органи. С помощта на този анализ се откриват млечница, бактериална вагиноза, трихомониаза. Възможностите на този метод позволяват да се открият скрити инфекции - различни видове херпес, HPV (папиломен вирус), както и идентифицирането на специален микроб, отговорен за развитието на стомашни язви - хеликобатер.

Днес можете да си направите PCR тест в почти всяка частна или обществена лаборатория. Тези видове тестове се провеждат за всички, деца и възрастни. В зависимост от целта на анализа, в зависимост от пола, се извършва анализ на различен биологичен материал.

И така, PCR анализът при мъжете се извършва чрез кръв или урина, уретрален секрет, слуз от фаринкса или носа, простатен сок или дори сперма. PCR анализ при жени е възможен в кръв и урина, вагинален секрет, секрет от уретрата, назална слуз и фаринкса.

Много често PCR анализът се използва по време на бременност, с негова помощ се откриват скрити инфекции във влагалищния секрет или кръвта, изискващи специално наблюдение през този период, а понякога и адекватно лечение.

PCR как да вземете анализа

Анализът за инфекция по този метод се предписва от лекар, често събирането на материал се извършва незабавно в кабинета на лекар - уролог или гинеколог. Как се прави PCR анализ?

Тестовият материал се смесва с реактиви в лабораторията и се чака реакцията. В присъствието на патогени копията на тяхната ДНК или РНК се размножават. Апаратът сравнява идентифицираните фрагменти от генетичен материал с бази данни и точно идентифицира причинителя на инфекцията. При необходимост се посочва и количеството на патогена в определени телесни течности. Обикновено изследването продължава не повече от 1-2 дни, ако е необходимо, се извършват експресни тестове.

Откъде се взема PCR анализът? Това ще зависи от това какви видове патогени се очакват. Ако е ХИВ или хепатит се взема кръв, ако са полови инфекции се взема натривка от уретрата или влагалището. При съмнение за мононуклеоза или херпес се взема натривка от гърлото. Могат да се използват и урина, цереброспинална течност, секрет от рани, храчки и др.

PCR кръвен тест

За точни резултати и диагностика на инфекции е важно кръводаряването да става сутрин на гладно. Кръвен тест чрез PCR е в състояние да идентифицира патогени на опасни заболявания - ХИВ, хепатит, сифилис. По време на периоди на обостряне и активност на вируса в кръвта могат да бъдат открити херпесни вируси, папиломавируси и някои други.

PCR анализ: подготовка

За абсолютната точност на анализа е важна правилната подготовка за него. Най-лесният начин да се подготвите за кръвен тест, няма ограничения за диета или активност, трябва да дарите кръв сутрин, на празен стомах. Анализ на урината се взема след измиване на гениталиите, от средната част в специален стерилен контейнер. PCR анализът от гениталния тракт заслужава специално внимание, така че е важно да знаете как да се подготвите. Един ден преди изследването сексът е забранен, препоръчително е да не се уринира преди изследването. При менструация при жени датата на анализа се отлага с 3-5 дни от момента на последното освобождаване.

Колко време отнема PCR анализ

Анализът, в зависимост от възможностите на лабораторията, може да се подготви от няколко часа до няколко дни. Средно колко дни се прави PCR анализ? Обикновено това е един или два дни. В спешни случаи анализът може да се извърши в същия ден, след няколко часа.

В повечето случаи пациентите трябва да се справят със ситуация, при която се изисква PCR диагностика за изследване или определяне на заболяването. Важно е да разберете какво представлява и защо е необходимо.

Методът на полимеразна верижна реакция (PCR) е изследване, което помага да се идентифицират много заболявания в началните етапи на развитие. Същността му се състои в намирането на ДНК или РНК на патоген, присъстващ в тялото. PCR ви позволява да определите патогена в случаите, когато други видове изследвания са неефективни.

Популярността на този метод се дължи на неговата простота и широчината на използване. Използва се от клиницистите за диагностициране на различни заболявания. Позволява ви бързо да провеждате сложни количествени и геномни изследвания.

Едно от най-важните медицински приложения на класическия PCR метод е откриването на микроорганизми, които са способни да причинят патологични състояния.

Същността на PCR анализа

PCR диагностиката (която се обяснява от молекулярната биология) е техника за молекулярно клониране, използвана за анализиране на кратка последователност от ДНК, която присъства в минимални количества в проби, съдържащи генетичен материал. Този метод често се нарича "ДНК копирна машина".

PCR диагностиката се извършва in vitro (извън тялото) в лаборатория и се основава на естествения процес на дублиране на ДНК преди нейното разделяне. Освен че може да открие вирус, бактерия или друг микроорганизъм в проба, PCR дава възможност да се идентифицира техният брой.

При заболявания като хепатит С или инфекция с вируса на човешката имунна недостатъчност (HIV), вирусният товар е добър показател за това къде се намира болестта и колко ефективна е терапията.

Въоръжени с тази информация, лекарите могат да определят кога трябва да започне лечението и да контролират процеса. Това ви позволява да създадете индивидуален подход към всеки пациент.

PCR диагностиката включва три етапа, във всеки от които количеството на целевата ДНК се увеличава значително. В резултат на такава реакция се получават повече от един милиард копия на оригиналната или „целева“ ДНК, което позволява да се оцени наличието на вируса в тялото. Това е основното свойство на PCR метода.

Предимства и недостатъци на метода

PCR диагностиката (какво представлява, описано по-горе) е описана подробно от Keri Mullis през 1983 г. Оттогава методът е много популярен в лабораторната практика.

Основните предимства на този вид изследване са:

• универсалност;
• бързина на резултатите;
• висока вероятност за получаване на надеждни резултати;
• специфичност;
• разнообразие от заболявания, които могат да бъдат идентифицирани.

Универсалността на PCR метода се състои във възможността за използване на всякакви човешки физиологични материали. Дори един косъм е достатъчен за анализ.

Процесът на обработка на данни, благодарение на автоматизацията, може да отнеме няколко часа. Специфичността се състои в изолирането на специфичен ДНК фрагмент, характерен за определен патоген. С помощта на PCR анализ могат да се диагностицират много заболявания, както в остър стадий, така и в латентен стадий.

Но въпреки огромния брой предимства, PCR диагностичният метод има и недостатъци:

• вероятността от фалшиви положителни резултати;
• висока чувствителност;
• променливост на микроорганизмите.

Основният недостатък на метода е невъзможността на PCR да разграничи живите микроорганизми от мъртвите.. По правило това се отнася за ситуация, в която трябва да се оцени успехът на лечението. В този случай, ако заболяването е лекувано, тогава мъртвите клетки остават в човешкото тяло за известно време и отнема известно време от 4 до 6 седмици, за да се обновят напълно.

Високата чувствителност е предимство и в същото време недостатък. Някои микроорганизми присъстват в малки количества в тялото. Ето защо в този случай този диагностичен метод не е информативен и се препоръчва да се използват други видове изследвания.

Всеки микроорганизъм може да мутира. И въпреки че процесът на усилване използва специфичен фрагмент, който е най-малко податлив на промени, той все още може да придобие мутации и да стане невидим за тестовата система. Тази ситуация обяснява факта, че различните системи за лабораторни анализи могат да покажат напълно различни резултати.

В какви области се използва методът?

PCR изследването може да се използва в клиничната практика за идентифициране на различни заболявания. Той се използва широко в гинекологията, урологията, гастроентерологията, онкологията и др. В допълнение, той се използва ефективно в съдебната медицина за установяване на самоличност и бащинство.

Този тип изследване се използва на етапа на планиране и по време на бременност. Извършва се анализ за TORCH инфекция, за да се установи наличието на инфекция в тялото на жената. Болестите, причинени от една от инфекциите, могат да бъдат леки за жената, но да причинят сериозни вродени дефекти на плода, чак до неговата смърт.

Също така диагностичният метод PCR помага да се определи генетичната предразположеност на дадено лице към развитието на определени заболявания в бъдеще.

Какви инфекции се откриват чрез PCR диагностика

PCR методът помага за идентифициране на вируси, бактерии и гъбички.

Най-често срещаните заболявания, които могат да бъдат диагностицирани с него:

Какви биологични материали се изследват

Като се има предвид заболяването, симптомите и целите на изследването, PCR диагностиката може да използва всяка физиологична течност или парче тъкан.

Може да е:

• кръв;
• слюнка;
• храчки;
• урина;
• екскрети;
• цитонамазка от орофаринкса;
• парче засегната тъкан;
• синовиалната течност;
• изстъргване от влагалището при жените или от уретрата при мъжете;
• еякулат;
• коса и други.

При заболявания на пикочно-половата система се взема урина, намазка от влагалището при жените или от уретрата при мъжете. Дарява се венозна кръв за диагностициране на заболявания като ХИВ, различни видове хепатити, TORCH инфекции.

За да се изключи или потвърди онкологията, по време на хирургични интервенции се отстраняват парчета тъкан за биопсия.

Как да се подготвим за анализ

Характеристиките на подготовката за изследването зависят от представения биоматериал. Трябва също да се помни, че е необходимо да се изключи употребата на антибиотици и други лекарства. За да наблюдавате ефективността на лечението, трябва да поддържате интервал след приема на лекарствата най-малко 4 седмици.

Кръвта се дава сутрин на гладно. Урината и изпражненията трябва да се поставят в абсолютно стерилен контейнер, предназначен за това. В същото време, преди събиране на урина, е необходимо да се извърши хигиена на външните полови органи.

Ако се направи намазка, трябва:

• не уринирайте в продължение на 3 часа;
• не се препоръчва измиване и душ предния ден (за жени);
• ден за спиране на сексуалната активност;
• жените трябва да вземат цитонамазка в средата на цикъла.

Етапи на PCR изследване

Преди започване на PCR трябва да се изолира ДНК от пробата. Изолирането на ДНК е многоетапен процес, който може да се извърши ръчно или инструментално.

След подготовката на пробата започва тристепенният PCR процес:

• отделяне на таргетната ДНК (денатурация);
• амплификация (умножаване) на ДНК фрагменти;
• детекция (идентификация) на амплифицирани ДНК фрагменти.

Първата стъпка на PCR се нарича денатурация.Същността му се състои в това, че епруветка с ДНК проби се нагрява до високи температури (приблизително 90 градуса). Поради високите температури се разрушават слабите връзки между нуклеотидите, които образуват кода на молекулите. В резултат на това двойноверижната ДНК или РНК се разделя на две отделни вериги.

За "чистотата" на изследването към изследвания биоматериал се добавя специален разтвор, който разтваря органични вещества. Продължителността на този етап зависи от вида на материала за изследване и инфекциозния агент.

PCR диагностиката (какво е, описано по-горе) на втория етап умножава ДНК фрагменти въз основа на ДНК на самата инфекция. PCR не копира цялата нуклеинова киселина в пробата. Той копира само специална последователност от генетичния код, кратък фрагмент (праймер).

На втория етап тръбата се охлажда.Целият процес на PCR е автоматизиран от машина, наречена термостат или циклер, и може да бъде завършен в рамките на часове. PCR машината е програмирана да променя температурата на реакционната смес на всеки няколко минути. Това се случва, така че късите фрагменти да могат да се свържат с едноверижния шаблон.

Усилването става за 30-40 цикъла. През този период лаборантът копира ДНК фрагмента и увеличава количеството му чрез верижна реакция. Така с всеки цикъл броят на копията нараства до няколко милиона или дори милиарди.

В третата фаза на изследването се открива наличието на ДНК на вируси и бактерии.Това става като получената смес се разпредели и към нея се добави специален разтвор. Тази течност позволява на фрагментите на ДНК да придобият определен цвят под въздействието на ултравиолетовите лъчи. Това е показател, че в човешкото тяло има патогенни микроби.

PCR по време на бременност

PCR диагностиката (какво е, описано по-горе) може да бъде предписана за първи път по време на бременност, тъй като това е задължителна процедура. Този метод помага да се идентифицират скрити инфекции и заплахата от малформации на плода.

За анализ използвайте:

Има заболявания с инфекциозен характер, които могат да повлияят неблагоприятно на развитието на плода, причинявайки дефекти, причинявайки преждевременно раждане и спонтанни аборти. Те са особено опасни през първия триместър на бременността и в повечето случаи са медицинско показание за аборт. Тези инфекции се наричат ​​колективно TORCH комплекс.

PCR анализът помага да се установи наличието или отсъствието на инфекция в тялото на бременна жена. Често се извършва на етапа на планиране на бременността или през първия триместър. При положителен резултат е необходим повторен тест. И едва след потвърждаване на резултатите се предписва подходящо лечение.

PCR за диагностика на ХИВ

PCR методът за диагностициране на HIV инфекцията е скъп тест и се използва при специални показания. Те включват донорство и може да се предписва и на пациенти, пострадали при автомобилна катастрофа с хора с ХИВ.

PCR помага да се идентифицира наличието на инфекция в ранните етапи, преди тялото да развие антитела срещу ХИВ. Резултатът с висок процент на вероятност изследването може да покаже вече 5-14 дни след проникването на вируса.

В други случаи наличието на вирус в човешкото тяло помага да се установи ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA). Той открива антитела срещу ХИВ в кръвта на човек, които започват да се произвеждат 1-3 месеца след заразяването. Количественото определяне на анализа на микроорганизмите е необходимо за контрол на лечението на пациентите.

PCR за диагностика на хепатит

Вирусният хепатит С е сериозно заболяване, което може да доведе до развитие на цироза на черния дроб. По време на инкубационния период, който може да бъде до 12 месеца, вирусът не се проявява по никакъв начин, пациентът практически не е заразен и вирусът не може да бъде определен чрез рутинен кръвен тест.

Най-често при ненавременно лечение заболяването става хронично и заплашва с множество усложнения.

При заразяване с хепатит В инкубационният период не е толкова дълъг и първите симптоми могат да се наблюдават след 4 седмици. Именно през този период ELISA може да покаже наличието на вируса в тялото.

PCR методът позволява:

• идентифициране на болестта на етапа на инкубационно развитие;
• разрешаване на съмнителни анализи на други изследвания;
• оценка на ефективността на антивирусната терапия.

Липсата на ДНК вирус на хепатит след лечението е признак за неговата ефективност.

Тест за туберкулоза

Развитието на туберкулозата се провокира от бацила на Кох, който може да влезе в човешкото тяло по въздушно-капков път. Болестта има две форми: латентна и открита. В първия случай заразеният не е носител на инфекцията и микобактериите в храчките не се откриват дори чрез PCR. Тази форма все още има опасност, тъй като е в състояние да се премести в открита сцена.

Отвореният (активен) етап представлява опасност за другите, дори и при стриктно спазване на правилата за лична хигиена. За диагностициране на заболяването се използват флуорография, томография и рентгенография на гръдния кош. Също така за тази цел се използва кожен туберкулозен тест (тест на Манту). Но най-ефективният метод за изследване е PCR.

Следните проби се използват като тестови проби:

• кръв;
• храчки;
• бронхиална течност.

PCR за HPV диагностика

Диагнозата за HPV се извършва при симптоми на заболяването, като папиломи и брадавици в гениталната област. Също така, изследването се предписва на етапа на планиране на бременността, в случай на безплодие, спонтанни аборти, както и в случай на инфекция на един от партньорите, тъй като един от механизмите на предаване на вируса е сексуален.

Най-опасно е не самото присъствие на вируса в тялото, а неговият вид. Някои от неговите видове (16 и 18) са силно онкогенни и могат да причинят рак на маточната шийка при жените. PCR методът може да бъде предписан заедно с други видове изследвания. За анализ най-често се използва намазка от гениталните органи. Като биоматериал рядко се използват кръв, урина и вагинален секрет.

С херпес

Този тест диагностицира генитална инфекция с херпес симплекс вирус тип 1 и 2 (HSV1/HSV2). Ако сте положителни за HSV2, трябва да се изследвате за ХИВ и други полово предавани болести. Анализът изисква венозна кръв на пациента.
Урината, секретът и съдържанието на обрива също могат да бъдат изследвани, ако са налице симптоми.

Цялостно PCR изследване

Ако има индикации или с цел предотвратяване на заболявания, може да се предпише набор от тестове чрез PCR. Най-често инициаторът е самият пациент, има случаи, когато се предписва цялостен преглед, за да се предотвратят огнища на определени заболявания в определен регион.

PCR-12 е цялостно изследване, което обхваща следните инфекции:

1. Хепатит.
2. Херпес.
3. STD.
4. Туберкулоза.
5. Енцефалит.
6. Кандидоза.
7. Хеликобактерна инфекция.
8. Цитомегаловирус.
9. Мононуклеоза.
10. Онковируси.
11. листериоза.

Дешифриране на PCR анализа

След анализа чрез PCR може да се обяви положителен или отрицателен резултат.

Резултатите от PCR диагностиката изглеждат така. Какво е това и как да дешифрира лекарят ще каже

Точност на PCR диагностика

В повечето случаи PCR диагностиката дава много точни резултати. Но в някои случаи са необходими допълнителни методи за изследване, за да се потвърди правилността на диагнозата.

Какво може да причини фалшив резултат?

Фалшивите положителни резултати могат да бъдат резултат от неспазване на правилата за събиране на анализи и провеждане на самата изследователска процедура.

Самият пациент може да бъде виновник за невярна информация в случай на неадекватна подготовка за доставка на биоматериал. Оборудването на лабораторията и професионализмът на лекаря могат пряко да повлияят на резултатите от изследването.

Къде да получите PCR диагностика

PCR диагностиката се извършва в частни клиники и лаборатории по лекарско предписание или по инициатива на пациента с цел профилактика.
Предпочитание трябва да се даде на клиники и лаборатории с модерно оборудване, които са на медицинския пазар от няколко години и са се доказали.

PCR анализ: цена и време

Този диагностичен метод е скъп. Цената му варира от 200 до 500 рубли за всеки тип. Цялостният преглед за наличието на няколко инфекции ви позволява да спестите значително в сравнение с плащането за всяко отделно изследване.

Продължителността на изследването зависи от вида на инфекцията и може да отнеме от 1 до 5 дни. Също така тези показатели зависят от оборудването на лабораторията и квалификацията на медицинския работник.

PCR диагностиката (какво е описано подробно в тази статия) е най-точният и бърз метод за изследване. Това е едно от най-важните открития на ХХ век. в медицината.

Благодарение на този метод стана възможно пълно излекуване на много заболявания. Но не забравяйте, че PCR има някои недостатъци и неговата ефективност понякога се увеличава във връзка с използването на други изследователски методи.

Форматиране на статията: Владимир Велики

Видео за PCR диагностика

Относно точността на PCR:

PCR анализът е най-чувствителният и точен метод, използван за диагностициране на полово предавани инфекции. Използва се не само за полово предавани болести, но и за оценка на условно патогенната микрофлора на вагината, червата и дихателната система. Времето на PCR е различно за различните инфекции и зависи от опцията за анализ: качествен или количествен.

Колко дълго се подготвя PCR анализ, най-много се притесняват, разбира се, пациенти с полово предавани болести или със съмнение за тях. Защото е много важно да започнете лечението навреме, а не да заразите близки.

За повечето генитални инфекции времето за извършване на качествен PCR анализ, който само определя наличието на определена инфекция, е 1 ден. През деня можете да откриете хламидия, микоплазма, уреаплазма, гарднерела, трихомонада, гонорея, херпес, цитомегаловирус, HPV, кандида и много други видове микроорганизми, които причиняват полово предавани болести. Материалът за изследване обикновено е:

1. Остъргване от уретрата, от главата на пениса или влагалището.
2. Остъргване от лигавицата на орофаринкса, конюнктивата, ректума.
3. Остъргване от ерозии и рани.
4. Урина.
5. Секрет на простатата, сперма.
6. Храчки, слюнка.

Извършват се малко по-дълги количествени PCR тестове, които определят не само патогена, но и количеството му върху лигавицата или в биологичната течност. Срокът на такъв PCR анализ е 2-3 дни.

ДНК диагностиката на ППИ се извършва не само с помощта на остъргвания. При редица инфекции се взема кръв и се определя наличието на вируси в 1 ml. Такива изследвания са необходими при скрининг за ХИВ, хепатит, CMV, херпесни вируси, токсоплазмоза.

Колко дни PCR за ХИВ тревожи не по-малко, отколкото при диагностицирането на бактериални полово предавани болести. Факт е, че този анализ е най-ранният от тестовете за СПИН / ХИВ и показва наличието на РНК на вируса на имунната недостатъчност, когато други тестове все още не са реагирали.

Качествените PCR кръвни тестове за HIV, хепатит и други инфекции се правят най-често до 3 дни. Количествените могат да отнемат 5-7, понякога до 14.

Колко дълго се изготвя PCR анализ зависи не само от вида на открития вирус или бактерия, но и от лабораторията, която го извършва. В нашите клиники материалът за изследване се доставя директно в лабораторията в рамките на няколко часа. Следователно условията на PCR в реално време са минимални, а точността на изследването е 99-100%. Анализите на нашите пациенти се извършват само в тези клинико-диагностични лаборатории, които са се доказали най-добре в извършването на PCR анализи.

По-бързо от описаното в тази статия, PCR анализът не може да бъде извършен поради технологията си, тъй като отнема време за растеж на ДНК или РНК вериги.